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脱氢酶(DHA)测试盒

简要描述:脱氢酶(DHA)测试盒 脱氢酶(dehydrogenase, DHA)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:72

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

脱氢酶(DHA)测试盒

微量法100/96样

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

脱氢酶(dehydrogenase, DHA) 是一类催化物质氧化还原反应的酶,催化底物通过细胞色素系统被氧化,释放的能量供机体使用,是生物体取得能量的一种方式。

测定原理

在细胞呼吸过程中,氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈现红色,于485nm测定其吸光值,即得脱氢酶活性。

自备实验仪器及用品

筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、冰、蒸馏水、甲醇(不允许快递,请用户自备)。

试剂的组成和配制

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存

试剂一:粉剂×1瓶,使用前加10mL试剂二溶解,4℃避光保存(尽量现配现用)。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:甲醇,自备

样品处理

  1. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

  2. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后8000g,4℃,离心20min。

  3. 液体:直接检测。

测定步骤和操作表


空白管

测定管

样品(μL)


100

蒸馏水(μL)

100


试剂一(μL)


100

试剂二(μL)

100


充分混匀,37℃培养24h

试剂三(μL)

900

900

振荡1h,8000g,25℃,离心5min,取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板,测定A485,△A=A测定-A空白管。空白管只要做一管。

脱氢酶活力计算

  1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.0422x - 0.0312;R2 = 0.9988;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活单位定义:在37℃时,每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min / mg prot)=(△A+0.0312)÷ 0.0422×V反总÷(Cpr×V样)÷T= 0.181×(△A+0.0312)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活单位定义:在37℃时,每克样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /g 鲜重)=(△A+0.0312)÷ 0.0422×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T= 0.181×(△A+0.0312)÷W

3. 按液体体积计算

酶活单位定义:在37℃时,每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /mL)=(△A+0.0312)÷ 0.0422×V反总÷V样÷T= 0.181×(△A+0.0312)

 

V反总:反应总体积,1.1mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;T:培养时间,1d=1440min;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL。

b. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.0211x - 0.0312;R2 = 0.9988;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活单位定义:在37℃时,每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min / mg prot)=(△A+0.0312)÷ 0.0211×V反总÷(Cpr×V样)÷T= 0.362×(△A+0.0312)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活单位定义:在37℃时,每克样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /g 鲜重)=(△A+0.0312)÷ 0.0211×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T= 0.362×(△A+0.0312)÷W

3. 按液体体积计算

酶活单位定义:在37℃时,每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /mL)=(△A+0.0312)÷ 0.0211×V反总÷V样÷T= 0.362×(△A+0.0312)

 

V反总:反应总体积,1.1mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;T:培养时间,1d=1440min;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL。

注意事项:

配制好的试剂一避光保存于4℃,最好在一周内使用,若出现红色,则不能使用。


上海牧荣生物科技有限公司

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脱氢酶(DHA)测试盒

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