详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
---|---|---|---|
应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
脲酶(UE)测试盒
微量法100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
UE能够水解尿素,产生氨和碳酸。UE活性与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关,反应了氮素状况。
测定原理:
利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1瓶,临用前加入9mL蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的试剂4℃保存;
试剂二:液体22mL×1瓶,4℃保存;
试剂三A液:液体×1支,4℃保存;试剂三B液:液体×1瓶,4℃保存;临用前将A液倒入B液中混合,待用;用不完的试剂4℃保存一周;
试剂四:液体2mL×1瓶,4℃保存;
样本的前处理:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至578nm,蒸馏水调零。
2、酶促反应
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
样本(μL) | 20 | 20 |
试剂一(μL) | 90 | |
蒸馏水(μL) | 90 | |
试剂二(μL) | 190 | 190 |
混匀,放入37℃水浴1h后,10000g 25℃离心10min,取上清液。
2、将上清液稀释10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL蒸馏水)。
3、测氨量(在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂)
测定管 | 对照管 | |
稀释后的上清液(μL) | 80 | 80 |
试剂三(μL) | 15 | 15 |
试剂四(μL) | 15 | 15 |
充分混匀,室温放置20min
蒸馏水(μL) | 90 | 90 |
混匀,于578nm处,蒸馏水调零,读吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
UE活力计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值A。
1、血清(浆)UE活力的计算:
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力(μg/min/mL)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷V样÷T=27.32×(ΔA -0.0373)
单位的定义:每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
2、组织、细菌或细胞中1μg NH3-N活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力(μg/min/mg prot)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(V样×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力(μg/min/ g 鲜重)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力(μg/min/104 cell)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.0546×ΔA
10:稀释倍数;T:反应时间,60min; V反总:反应体系总体积:0.3mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V样总:提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量, g;500:细菌或细胞总数,500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.04575x +0.0373;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值A。
1、血清(浆)UE活力的计算:
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力(μg/min/mL)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷V样÷T=54.64×(ΔA -0.0373)
单位的定义:每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
2、组织、细菌或细胞中1μg NH3-N活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力(μg/min/mg prot)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷(V样×Cpr)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力(μg/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力(μg/min/104 cell)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.1092×ΔA
10:稀释倍数;T:反应时间,60min; V反总:反应体系总体积:0.3mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V样总:提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量, g;500:细菌或细胞总数,500万。
上海牧荣生物科技有限公司
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