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蔗糖酶测试盒

简要描述:蔗糖酶测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:87

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

蔗糖酶测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖酶(EC 3.2.1.26是碳水化合物消化吸收的关键酶之一,能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。

测定原理:

本试剂盒采用3.5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量,由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体2mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1支 ,4℃保存,用时加入1mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;

试剂三:液体3mL×1瓶,常温保存;

样品测定的准备: 

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。

  2. 样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL)

对照管

测定管

试剂一

15

15

蒸馏水

15


样本 

30

30

试剂二


15

置于25℃准确水浴10min

试剂三

30

30

混匀, 95℃水浴5min左右(盖紧,防止水分散失),冷却至室温

蒸馏水

210

210

混匀,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中测定各管520nm吸光值,ΔA=A测定-A对照,每个测定管需设一个对照管。

蔗糖酶活力计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.1296x -0.12;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。

3、按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖酶活力(μg/min/g鲜重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12) ÷W。

1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,10min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.0648x -0.12;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(V1×Cpr)÷T=1542×(ΔA +0.12)÷Cpr。

3、按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖酶活力(μg/min/g鲜重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=1543×(ΔA +0.12) ÷W。

1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,10min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。


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