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蛋白质羰基测试盒

简要描述:蛋白质羰基测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:45

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

蛋白质羰基测试盒

微量法100T/48S

注意:正式实验之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志,其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小,是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。

测定原理:

羰基与2,4-二硝*苯肼反应生成红色2,4-二硝*苯腙,在370nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器:

天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、无水乙醇、乙酸乙酯。

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂0.1g×5支,4℃避光保存。(使用前根据样品数,每支加1mL水溶解,每支为10个样品用量)

试剂二:液体6mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体6mL×1瓶,4℃保存。

试剂四:液体15mL×1瓶,4℃保存。

试剂五:根据测定样品量,将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。

试剂六:液体60mL×1瓶,4℃保存。

样品处理:

组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,于4℃,4000g离心10min,取上清,加入0.1mL试剂一,室温放置10min,4℃,10000g离心10min,取上清待测。

细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

血清等液体样本:直接测定。

测定步骤和操作表:

  1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至370nm。

  2. 操作表


对照管

测定管

样品(μL)

60

60

试剂二(μL)


120

试剂三(μL)

120


混匀,37℃避光反应1h

试剂四(μL)

150

150

静置5min,4℃,12000g离心15min,弃上清,留沉淀

试剂五(μL)

300

300

漩涡混匀,4℃,12000g离心10min,弃上清,留沉淀

试剂五(μL)

300

300

漩涡混匀,4℃,12000g离心10min,弃上清,留沉淀

试剂五(μL)

300

300

漩涡混匀,4℃,12000g离心10min,弃上清,留沉淀

试剂六(μL)

300

300

漩涡混匀,37℃温育15min,沉淀全部溶解后,4℃,12000g离心15min,取上清200μL于微量石英比色皿/96孔板中,测定A370。ΔA=A测定管-A对照管

计算公式:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

按照样本蛋白浓度计算

蛋白质羰基含量(μmol/mg prot)= [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(V样×Cpr) =0.227×ΔA370÷Cpr

按照样本重量计算

蛋白质羰基含量(μmol/g 鲜重)= [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(W ×V样÷V样总) =0.227×ΔA370÷W

3. 按照细胞数量计算

蛋白质羰基含量(μmol/104cell)= [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(细胞数量 ×V样÷V样总) =0.227×ΔA370÷细胞数量

按照液体体积计算

蛋白质羰基含量(μmol/mL)= [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷V样=0.227×ΔA370

V反总:反应体系总体积,0.3 mL;ε:羰基毫摩尔消光系数,22 L/mmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.06 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL,W:样本质量,g

  1. 用96孔板测定的计算公式如下

1. 按照样本蛋白浓度计算

蛋白质羰基含量(μmol/mg prot)= [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(V样×Cpr) =0.454×ΔA370÷Cpr

2. 按照样本重量计算

蛋白质羰基含量(μmol/g 鲜重)= [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(W ×V样÷V样总) =0.454×ΔA370÷W

3. 按照细胞数量计算

蛋白质羰基含量(μmol/104cell)= [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(细胞数量 ×V样÷V样总) =0.454×ΔA370÷细胞数量

4. 按照液体体积计算

蛋白质羰基含量(μmol/mL)= [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷V样=0.454×ΔA370

V反总:反应体系总体积,0.3 mL;ε:羰基毫摩尔消光系数,22 L/mmol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.06 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL,W:样本质量,g

 

注意事项:

1. 试剂一使用前根据要测定的样品数现配,配置好后4℃保存,若变为黑色,则不能使用。

2. 试剂二见光易分解,反应需严格避光。


上海牧荣生物科技有限公司

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