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丙氨酸氨基转氨酶(GPT/ALT)测试盒

简要描述:谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶(GPT/ALT)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶(GPT/ALT)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

GPT(EC 2.6.1.2)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞GPT活性很高,当肝细胞坏死,GPT释放到血液中,血清GPT活性显著增高。因此,GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。

测定原理

GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入2,4-二硝*苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。

试验中所需的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液:60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体2.5 mL×1瓶, 4℃保存; 

试剂二:液体2.5 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂三:液体25 mL×1瓶,4℃保存;

样品测定的准备

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。

  2. 在EP管或在96孔板中加入下列试剂

试剂名称(μL)

测定管

对照管

待测样本

10


煮沸10min的待测样本


10

试剂一  

25


蒸馏水


25

混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应20min

试剂二

25

25

混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应20min

试剂三

240

240

混匀,室温(25℃)放置10min,在505nm波长处测各管吸光度A。ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.4228x+0.0003   (x为标准品浓度,umol/mL;y为ΔA)。

2、血清(浆)GPT活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GPT(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0003)÷0.4228÷T×103=118.26×(ΔA-0.0003)

3、细胞、细菌和组织中GPT活力的计算

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GPT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0003)÷0.4228×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =118.26×(ΔA-0.0003)÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

(2) 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GPT(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA-0.0003)÷0.4228×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =118.26×(ΔA-0.0003)÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GPT(nmol/min/104 cell)=[(ΔA-0.0003)÷0.4228×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.236×(ΔA-0.0003)

V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,20min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;103:1umol/mL=103 nmol/mL。

b.使用96孔板测定的计算公式如下:

1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.2114x+0.0003   (x为标准品浓度,umol/mL;y为ΔA)。

2、血清(浆)GPT活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GPT(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0003)÷0.2114÷T×103=236.5×(ΔA-0.0003)

3、细胞、细菌和组织中GPT活力的计算

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GPT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0003)÷0.2114×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =236.5×(ΔA-0.0003)÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

(2) 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GPT(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA-0.0003)÷0.2114×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =236.5×(ΔA-0.0003)÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GPT(nmol/min/104 cell)=[(ΔA-0.0003)÷0.2114×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.473×(ΔA-0.0003)

V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,20 min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;103:1umol/mL=103 nmol/mL。

  1. 标准曲线线性范围为:0.01 umol/mL -2 umol/mL。

  2. ΔA线性范围为:0.01 -1。



上海牧荣生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

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谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶(GPT/ALT)测试盒




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