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谷氨酰胺合成酶(GS)测试盒

简要描述:谷氨酰胺合成酶(GS)测试盒 谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

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应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

谷氨酰胺合成酶(GS)测试盒

 微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺,不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。

测定原理

GS在ATP和Mg2+存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下与铁形成的络合物在540nm处有最大吸收峰,可用分光光度计测定。

所需的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液:100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:10mL×1瓶,-20℃保存;临用前37℃预热20min,充分混匀,如有沉淀,静置10min,取上清待用。

试剂二:10mL×1瓶,-20℃保存;临用前37℃预热20min,充分混匀,如有沉淀,静置10min,取上清待用。

试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存。用时每瓶加入5mL蒸馏水充分溶解待用。

试剂四:15mL×1瓶,4℃保存。

样本测定的准备

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

  2. 在EP管中加入下列试剂:

试剂名称(μL)

测定管

对照管

试剂一

160


试剂二


160

试剂三

70

70

样本

70

70

  混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)准确水浴30min

试剂四

100

100

混匀,25℃室温静置10min后,8000g,25℃离心10min,取200μL上清液至微量石英比色皿或96孔板中,测定540nm处的吸光值A。△A=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

 

GS活力单位的计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.8348x + 0.0008,R2 = 0.9999

1、血清(浆)GS活性

单位定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

计算公式:

GS(μmol/h/mL)=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷V样÷T

=10.268×ΔA

2、组织、细菌或细胞GS活性

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS(μmol/h/mg prot)=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷(Cpr×V样)÷T

=10.268×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS(μmol/h/g 鲜重)=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T

 =10.268×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS(μmol/h//104 cell)=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷(500×V样÷V样总)÷T

=0.021×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.3mL; V样:加入样本体积,0.07mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.4174x + 0.0008,R2 = 0.9999

1、血清(浆)GS活性

单位定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

计算公式:

GS(μmol/h/mL)=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反总÷V样÷T

=20.535×ΔA

2、组织、细菌或细胞GS活性

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS(μmol/h/mg prot)=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反总÷(Cpr×V样)÷T

=20.535×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS(μmol/h/g 鲜重)=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T

 =20.535×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS(μmol/h/104 cell)=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反总÷(500×V样÷V样总)÷T

 =0.041×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.3mL; V样:加入样本体积,0.07mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。


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