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谷氨酰胺酶(GLS)测试盒

简要描述:谷氨酰胺酶(GLS)测试盒 谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性测定试剂盒说 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

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应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

谷氨酰胺酶(GLS)测试盒

 微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GLS(EC 3.5.1.1是酰胺基水解酶,催化天冬酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

测定原理:

GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用奈氏试剂检测氨增加的速率,即可计算其酶活性。

需自备仪器和用品:

台式离心机、酶标仪、96孔板、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。

试剂组成和配制:

试剂一×2瓶,60 mL,4 ℃保存;

试剂二×1瓶,40 mL,4 ℃保存;

试剂三×1瓶,60 mL,常温保存;

试剂四×1瓶,5 mL,常温保存;

试剂五×1瓶,3 mL,常温保存;

试剂六×1瓶,3 mL,常温避光保存。

粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、酶标仪预热30min以上,调节波长至420nm。

2、样品测定(在EP管中加入下列试剂):

试剂名称(μL)

测定管

对照管

样本

25


蒸馏水


25

试剂一

100

100

试剂二

400

400

混匀,37℃水浴1 小时

试剂三

525

525

混匀,8000 g,25℃离心10 min;取上清液,在96孔板中加入下列试剂

上清液

130

130

试剂四

30

30

试剂五

20

20

试剂六

20

20

混匀,室温静置15min,420nm处读取测定管和对照管吸光值,计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管。

注意:

1、试剂六如出现沉淀,静置后取上清使用。

2、ΔAA测定管-A对照管)若出现负值,可能是酶活性较低,可将反应时间1h延长到2h,相应的在计算公式中除以2。

酶活性计算:

标准条件下测定的回归方程为y = 1.9244x + 0.0057,R2 = 0.9983;x为标准品浓度(μmol/mL),y为吸光值A。

1、血清(浆)GLS活性

单位定义:每mL血清(浆)每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS(nmol /min /mL)= (ΔA-0.0057) ÷1.9244×V反总÷V样÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)

 2、组织、细菌或细胞GLS活性

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位定义:每mg蛋白质每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。

GLS(nmol /min /mg prot)= (ΔA-0.0057) ÷1.9244×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)÷Cpr。

(2)按样本鲜重计算:

单位定义:每g组织每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。

GLS(nmol/min /g 鲜重)=(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)÷W。

(3)按细菌或细胞密度计算

单位定义:每1万个细菌或细胞每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS(nmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T ×1000       =0.7274×(ΔA -0.0057)

V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,60min;V反总:反应体系总体积,1.05mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.025mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万; 1000,μmol到nmol换算系数。


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