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酰基转移酶(AAT)测试盒

简要描述:酰基转移酶(AAT)测试盒 酰基转移酶(alcohol acyl transferase,AAT)活性测定试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

酰基转移酶(AAT)测试盒

微量法 100管/96样

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AAT是一个多功能蛋白大家族,主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应,在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。

测定原理:

AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇,释放的CoA还原DTNB生成TNB;TNB在412nm有吸收峰,测定412 nm吸光度增加速率可计算AAT活性。

自备仪器用品:

研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、无水乙醇。

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存。

试剂三:粉剂×1支,4℃避光保存。

粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

  3. 液体:直接检测。

AAT测定操作:

1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到412 nm,蒸馏水调零。

2、工作液的配制:临用前在试剂二瓶中加入18mL试剂一,充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、试剂三的配制:临用前加无水乙醇1mL充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存。

4、 空白管:在Ep管或96孔板中加入10μL提取液和180μL工作液,充分混匀,35℃反应15min,加入10μL试剂三,充分混匀,25℃静置10min,测定412nm处吸光值,记为A空白管。

5、 测定管:在Ep管或96孔板中加入10μL样本和180μL工作液,充分混匀,35℃反应15min,加入10μL试剂三,充分混匀,25℃静置10min,测定412nm处吸光值,记为A测定管。△A=A测定管- A空白管,空白管只要做一管。

AAT活性计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷(×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 98.04×△A÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min /g 鲜重) = △A ÷(×d)×V反总÷(W×V样÷V样总) ÷T 

= 98.04×△A÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷(×d)×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T

= 98.04×△A÷ 细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:每毫升样品每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min/mL) = △A ÷(×d)×V反总÷V样÷T

 = 98.04×△A

:TNB消光系数,13600L/mol/cm;d:比色皿光径:1cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:加入反应体系中上清液体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白含量,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,15 min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷(×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T 

=196.08×△A÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min /g 鲜重) = △A ÷(×d)×V反总÷(W×V样÷V样总) ÷T 

= 196.08×△A÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷(×d)×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T

=196.08×△A÷ 细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:每毫升样品每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min/mL) = △A ÷(×d)×V反总÷V样÷T

 = 196.08×△A

:TNB消光系数,13600L/mol/cm;d:96孔板光径:0.5cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:加入反应体系中上清液体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白含量,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,15min。

上海牧荣生物科技有限公司

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酰基转移酶(AAT)测试盒



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