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酪氨酸解氨酶(TAL)测试盒

简要描述:酪氨酸解氨酶(TAL)测试盒 酪氨酸解氨酶(Tyrosine ammonilyase,TAL)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

酪氨酸解氨酶(TAL)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:                           

TAL广泛存在于植物和微生物中,是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一。TAL能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)直接将酪氨酸转化为香豆酸,香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。

测定原理:

TAL能够分解酪氨酸产生香豆酸,使反应溶液333nm下的吸光度随反应时间而上升,根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。

需自备的仪器和用品:

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存;

试剂三:液体5mL×1瓶,4℃保存;

粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)果汁等液体样品:直接检测。

测定步骤:

  1. 酶标仪预热30min以上,调节波长至333nm。

  2. 准备96孔UV板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于340nm务必使用UV板)。

  3. 试剂二的配置:临用前在试剂二瓶中加入10mL试剂一充分溶解待用(用不完的试剂4℃保存一周,注意现配现用),在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

4、在EP管中依次加入如下试剂

试剂名称(μL)

测定管

对照管

样本上清

40

40

试剂一


360

试剂二

360


充分混匀,40℃保温60min

试剂三

20

20

混匀,10000g 4℃离心5min,取200μL上清至96孔UV板,333nm下测定吸光值A测定与A对照,ΔA=A测定-A对照

TAL活性计算:

1、血清(浆)或果汁TAL活性

单位的定义:每分钟每mL血清(浆)或果汁在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化

0.005为一个酶活力单位。

TAL(U/mL)=ΔA×V反总÷( V样÷V样总)÷0.005÷T =35×ΔA

2、组织、细菌或细胞TAL活性

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位定义:每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个

酶活力单位。

TAL(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.005÷T =35×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

(2)按样本鲜重计算:

单位定义:每分钟每g组织在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个

酶活力单位。

TAL(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T =35×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位定义:每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。

TAL(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T =0.07×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.42mL;V样:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,60 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。



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酪氨酸解氨酶(TAL)测试盒

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