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黄嘌呤氧化酶(XOD)测试盒

简要描述:黄嘌呤氧化酶(XOD)测试盒 黄嘌呤氧化酶(xanthione oxidase, XOD)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

黄嘌呤氧化酶(XOD)测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

XOD(EC 1.17.3.2催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子,是活性氧主要来源之一;同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心,肺,肝脏等组织中,当肝功能受损时,XOD大量释放到血清中,对肝损害的诊断具有特异性的意义。

测定原理:

XOD催化黄嘌呤产生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:30mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存。

粗酶液提取: 

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

操作步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至290nm,蒸馏水调零。

  2. XOD检测工作液的配制:用时在每瓶试剂二中加入15mL试剂一,充分混匀,待用;现配现用;

  3. 测定前将XOD检测工作液在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

  4. 准备96孔UV板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于340nm务必使用UV板)。

5、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL样本和250μL工作液,立即混匀并计时,记录290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。

XOD活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)XOD计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=2131×ΔA

2、组织、细菌或细胞中XOD计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T =2131×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=2131×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=4.26×ΔA

V反总:反应体系总体积,2.6×10-4 L;ε:尿酸摩尔消光系数,1.22×104 L/ mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)XOD计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=4262×ΔA

2、组织、细菌或细胞中XOD计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T =4262×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T =4262×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=8.52×ΔA

V反总:反应体系总体积,2.6×10-4 L;ε:尿酸摩尔消光系数,1.22×104 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500万。

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