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维生素B6测试盒

简要描述:维生素B6测试盒 维生素B6(Vitamin B6,VB6)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:59

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

维生素B6测试盒

微量法100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

维生素B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是一种水溶性维生素在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢,对生物体具有极其重要的作用。

测定原理

VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物,在390nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体70mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体1mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体8mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体8mL×1瓶,4℃避光保存。

样本处理

  1. 组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提30min,加蒸馏水0.4mL,混匀后于25℃,16000rpm离心10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟)。

  2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);加蒸馏水0.4mL,混匀后于25℃,16000rpm离心10min,取上清测定。

  3. 血清:直接测定。

测定操作


空白管

测定管

样品(μL)


40

试剂一(μL)

40


试剂二(μL)

40

40

试剂三(μL)

60

60

试剂四(μL)

60

60

充分混匀,25℃反应20min,于微量石英比色皿/96孔板,测定390nm处吸光值,记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.3635x+0.0205,R2 = 0.9986

1. 按照蛋白含量计算

VB6含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×Cpr)

= 13.76×(△A - 0.0205)÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

VB6含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×W÷V样总)

= 13.76×(△A - 0.0205)÷ W

3. 按照细胞数量计算

VB6含量(μg/104 cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)

= 13.76×(△A - 0.0205)÷ 细胞数量

4. 按照液体体积计算

VB6含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷V样

= 13.76×(△A - 0.0205)

V反总:反应总体积,0.2mL;:V样:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.1818x+0.0205,R2 = 0.9986

1. 按照蛋白含量计算

VB6含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反总÷(V样×Cpr)

= 27.52×(△A - 0.0205)÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

VB6含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818 ×V反总÷(V样×W÷V样总)

= 27.52×(△A - 0.0205)÷ W

3. 按照细胞数量计算

VB6含量(μg/104 cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)

= 27.52×(△A - 0.0205)÷ 细胞数量

4. 按照液体体积计算

VB6含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反总÷V样

=27.52×(△A - 0.0205)

V反总:反应总体积,0.2mL;:V样:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g

注意事项

  1. 若测定结果中吸光值超过1,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

  2. 蛋白浓度较高的样品,比如动物组织,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再测定,在计算公式中乘以稀释倍数。

  3. 显色完成后立即进行测定。


上海牧荣生物科技有限公司

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