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纤维素含量(CLL)测试盒

简要描述:纤维素含量(CLL)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:221

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

纤维素含量(CLL)测试盒  

微量法 100管/96样

正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖,通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起,是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维,自然界中分布广、含量最多的一种多糖。

测定原理:

纤维素为β-葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在强酸作用下,可脱水生成β-糠醛类化合物。β-糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合,生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体100mL× 1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体10mL× 1支,4℃保存。

样品的前处理:

  1. 细胞壁的提取:取约0.3g样本,加入1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,90℃水浴20min(加热过程中EP管可能爆开,建议用胶带封口或使用防爆EP管),冷却至室温,6000g 25℃离心10min,弃上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡2min左右,6000g 25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1mL试剂一(去除淀粉)浸泡15小时,6000g 25℃离心10min,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM)。

  2. 纤维素的提取:称取烘干的CWM 约5mg,加入0.5mL蒸馏水充分匀浆(若烘干物质质地坚硬,可先研碎后再加入0.5mL蒸馏水匀浆,或者用匀浆器匀浆),匀浆液转移至EP管中,用蒸馏水定容至0.5mL,置于冰水浴中,缓慢加入0.75mL浓硫酸,混匀,冰水浴中静置30min。8000g 4℃离心10min,取上清液,用蒸馏水稀释20倍后待测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零。

2、调节水浴锅至95度。

3、工作液的配制:在试剂二中加入4mL试剂三,充分溶解,如较难溶解,可加热搅拌;用不完的试剂4℃保存一周;

4、加样表(在EP管中反应):

试剂(μL)

空白管

测定管

样本


150

蒸馏水

150


工作液

35

35

浓硫酸

315

315

混匀,置95度水浴中10min(盖紧,以防止水分散失),冷却至室温后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,于620nm处,分别读取空白管和测定管吸光值,ΔA=A测定管-A空白管。

注意:

1、空白管只要做一管。

2、由于浓硫酸具有强腐蚀性,请谨慎操作。

纤维素含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为y = 7.875x - 0.0043;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、按样本质量计算:

纤维素(mg /g干重)= [(ΔA+0.0043) ÷7.875×V1]÷(W×V1÷V2)×20=3.17×(ΔA+0.0043) ÷W。

V1:加入样本体积,0.15mL;V2:加入提取液体积,1.25mL;W:样本干重,5×10-3g;20:样本稀释倍数。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为y = 5.25x - 0.0043;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、按样本质量计算:

纤维素(mg /g干重)= [(ΔA+0.0043) ÷5.25×V1]÷(W×V1÷V2)×20=4.76×(ΔA+0.0043)

÷W。

V1:加入样本体积,0.15mL;V2:加入提取液体积,1.25mL;W:样本干重,约5×10-3g;20:样本稀释倍数。

注意:*低检测限为1mg/g干重或10ng/ mg prot


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