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糖原含量测试盒

简要描述:糖原含量测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:118

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

糖原含量测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖,是糖的主要的储存形式之一,主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量,分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度,当血糖升高时可在肝脏合成糖原,血糖降低时,肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此,肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时,肌糖原不能直接分解成血糖,必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。

测定原理:

蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原,在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:0.1mg/mL 的葡萄糖标准液 10mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶, 4℃保存;

糖原提取:

1﹑细胞或细菌:收集500~1000万细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;加入0.75mL提取液超声波破碎细菌或细胞(功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);转移至10mL试管中,95℃水浴20min(盖紧,防止水分散失),隔5min振摇试管1次,使充分混匀;取出试管冷却后,用蒸馏水定容到5ml,混匀,8000g 25℃离心10min,取上清液待测。

2﹑组织:称取0.1~0.2g样品,加入0.75ml提取液充分匀浆;转移至10ml试管中;95℃水浴20min(盖紧,防止水分散失),隔5min振摇试管1次,使充分混匀;待组织全部溶解后,取出试管冷却后,用蒸馏水定容到5ml,混匀,8000g 25℃离心10min,取上清液待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零。

2、调节水浴锅至95℃。

3、试剂二工作液的配制:在试剂二中倒入6mL蒸馏水,缓慢倒入24mL浓硫酸,充分溶解混匀后使用;用不完的试剂4℃保存一周;

4、加样表(在EP管中反应):

试剂(μL)

空白管

标准管

测定管

待测样本



60

试剂一


60


蒸馏水

60



试剂二

240

240

240

混匀,置95℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却,取200μL转移至微量石英比色皿或96孔板中,于620nm波长处,分别读取空白管、标准管和测定管吸光度,分别记为A1、A2和A3。

注意:1、空白管和标准管只要测一次。

如果A3-A1大于2,需要将样本用蒸馏水稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。

糖原含量的计算:

1、按照样本质量计算

糖原(mg/mL)=1.11×(C标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)= 0.555×(A3-A1)÷(A2-A1)÷0.05

2、按照蛋白质含量计算

糖原(mg/mg prot)=1.11×(C标准×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)=0.111×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷Cpr

1.11:是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数,即111ug糖原用蒽酮试剂显色相当于100ug葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色;C标准管:标准管浓度,0.1mg/mL;V1:加入反应体系中待测样本体积,0.06mL;V2:加入提取液体积,5mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

注意:*低检测限为10ng/g鲜重或0.1ng/ mg prot


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