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糖原磷酸化酶a(GPa)测试盒

简要描述:糖原磷酸化酶a(GPa)测试盒 糖原磷酸化酶a(Glycogen phosphorylase a,GPa)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-09
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

糖原磷酸化酶a(GPa)测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代谢的关键酶,使糖原分子从非还原端逐个断开α-1,4-糖苷键移去葡萄糖基,释放1-磷酸葡萄糖,直至临近糖原分子α-1,6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和无活性的糖原磷酸化酶b(GPb)两种形式。糖原的分解主要在GPa的催化下进行。

测定原理:

未添加激活剂时,GPa催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映GPa活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体16 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;

试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;

试剂四:粉剂×1支, -20℃保存;

样本的前处理:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零;

  2. 工作液的配制:临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

  3. 试剂三的配制:临用前在试剂三管中加入1mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

  4. 试剂四的配制:临用前在试剂四管中加入1mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

  5. 将工作液、试剂三和试剂四置于37℃预热5分钟;

  6. 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂三、10μL试剂四、10μL蒸馏水和160μL工作液,立即混匀,记录340nm处5min后的A1和10min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。

GPa活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

(1)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GPa(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GPa(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=643×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

b.用96孔板测定的计算公式如下:

(1)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GPa(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GPa(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=1286×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。


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糖原磷酸化酶a(GPa)测试盒




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