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磷脂酶C(PLC)测试盒

简要描述:磷脂酶C(PLC)测试盒 磷脂酶C( Phospholipases C,PLC )试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-09
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

磷脂酶C(PLC)测试盒

微量法100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

磷脂酶C(EC3.1.4.3)是一种水解甘油磷酸酯C3位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶,广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中,在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。

测定原理

磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝基苯酚,在410nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体102mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体8mL×1瓶,4℃保存。

酶液提取

  1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。

  2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。

  3. 血清:直接测定。

测定操作


空白管

测定管

样品(μL)


20

试剂一(μL)

20


试剂二(μL)

100

100

充分混匀,37℃反应30min

试剂三(μL)

80

80

充分混匀,于微量石英比色皿/96孔板,蒸馏水调零,测定410nm处吸光值,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管。

酶活计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.0191x - 0.0103,R2 = 0.9991

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷(V样×Cpr) ÷T

= 17.45×(△A+0.0103)÷ Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/g 鲜重)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷(V样÷V样总×W) ÷T

= 17.45×(△A+0.0103)÷ W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义每104个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/104 cell)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量) ÷T

= 17.45×(△A+0.0103)÷ 细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/mL)= (△A+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷V样÷T

= 17.45×(△A+0.0103)

V反总:反应总体积,0.2mL;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min

  1. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.0095x - 0.0103,R2 = 0.9991

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反总÷(V样×Cpr) ÷T

= 35.09×(△A+0.0103)÷ Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/g 鲜重)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反总÷(V样÷V样总×W) ÷T

= 35.09×(△A+0.0103)÷ W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义每104个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/104 cell)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量) ÷T

=35.09×(△A+0.0103)÷ 细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/mL)= (△A+0.0103)÷ 0.0095×V反总÷V样÷T

= 35.09×(△A+0.0103)

V反总:反应总体积,0.2mL;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min


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磷脂酶C(PLC)测试盒




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