详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
---|---|---|---|
应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
碱性蛋白酶测试盒
微量法 100T/48S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类,属于丝氨酸蛋白酶。此外,该酶还能够水解酯键、酰胺键,具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一,广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
测定原理:
在碱性条件下,AKP水解酪蛋白生成酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝;钨蓝在680nm有特征吸收峰,测定680nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、0.5 mL EP管和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加5mL蒸馏水溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入10mL试剂一,沸水浴中磁力搅拌溶解。(可在烧杯上盖一层保鲜膜,注意观察,避免水分全部蒸发,一般加热15-30分钟,该试剂为过饱和试剂,充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用)。
试剂四:粉剂×1瓶, 4℃保存。临用前加20mL蒸馏水溶解。
试剂五:液体5mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体1mL×1支,0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液,4℃保存。
粗酶液提取:
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。
血清或培养液:直接测定。
细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到680 nm,蒸馏水调零。
2.试剂二、试剂三和试剂四置于40℃水浴保温30min。
3. 对照管:取0.5 mL EP管,加入20 μL粗酶液,40 μL试剂二,混匀后置于40℃水浴保温10min;加入40μL试剂三,混匀后8000g ,4℃离心10min;取40μL上清液,加入新的EP管,再加入200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,吸取200μL于680nm测定光吸收,记为A对照管。
4. 测定管:取0.5 mL EP管,加入20μL粗酶液,40μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min;加入40μL试剂二,混匀后8000g,4℃离心10min;取40μL上清液,加入新的EP管,再加入200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,吸取200μL于680nm测定光吸收,记为A测定管。(注意与空白管不同,先加试剂三,后加试剂二)
5. 空白管:取0.5 mL EP管,加入40μL蒸馏水,200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,吸取200μL于680nm测定光吸收,记为A空白管。
6. 标准管:取0.5 mL EP管,加入40μL标准品,200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,吸取200μL于680nm测定光吸收,记为A标准管。
注意:空白管和标准管只需要测定一次。
计算公式:
1. 按照样本蛋白浓度计算
AKP活性单位定义:30℃每毫克蛋白每分钟水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
AKP活性(nmol/min /mg prot)= C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷(Cpr×V1)÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2.按照样本质量计算
AKP活性单位定义:30℃每克样品每分钟催化水解产生1 nmol酪氨酸为1个酶活单位。
AKP活性(nmol/min /g鲜重)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷(W×V1÷V2)÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3. 按照液体体积计算
AKP活性单位定义:30℃每毫升样品每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
AKP活性(nmol/min/mL)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷V1÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
按照细胞数量计算
AKP活性单位定义:30℃每104个细胞每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
AKP活性(nmol/min /104 cell)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷(细胞数量×V1÷V2)÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷细胞数量
C标准品:0.25 μ mol/mL标准酪氨酸溶液;V反总:酶促反应总体积,0.1mL;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL);V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),0.02 mL;V2:提取液总体积(mL),1mL;T:催化反应时间(min),10min;W:样品质量(g)。
注意事项:
临用前配制的试剂配置好后3天内使用完毕。
上海牧荣生物科技有限公司
国内试剂耗材经销代理。
国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。
提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。
进出口货物代理服务。
公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。
公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。
碱性蛋白酶测试盒
产品咨询