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碱性木聚糖酶测试盒

简要描述:碱性木聚糖酶测试盒(比色法)/碱性半纤维素酶测试盒(比色法) 碱性木聚糖酶(Basic Xylanase,BAX)测定试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-09
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

碱性木聚糖酶测试盒

微量法100T/48S

注意:正式测定之前选择2+3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业碱的原料细胞壁以及β+葡聚糖,降低酿造碱物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料碱的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业碱,BAX一般分离自最适生长pH为9 +11的微生物。

测定原理:

BAX在碱性环境碱催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5+二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:

缓冲液:液体65mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。(若出现白色絮状或颗粒状沉淀,可60℃加热溶解后使用)。

试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

粗酶提取:

  1. 发酵液:发酵液于8000g,4℃,离心15min,取上清,作为待测样品。

  2. 酶干粉:称约0.1mg,加1mL缓冲液溶解待测。

  3. 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL缓冲液)进行冰浴匀浆,然后8000g,4℃,离心10min,取上清待测。

测定操作表:

  1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至540nm。

  2. 操作表


对照管

测定管

样品(μL)

60

60

缓冲液(μL)

90

90

试剂一(μL)


60

试剂二(μL)

90


混匀,盖紧瓶盖,50℃水浴,反应30min,立即沸水浴10min灭活。(注意不要让盖子爆开,以免进水,改变了反应体系)

试剂一(μL)

60


试剂二(μL)


90

混匀,沸水浴显色5min,取200µL于微量石英比色皿/96孔板中540nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管+A对照管。每个测定管设一个对照管。

BAX计算公式:

  1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 2.8432x - 0.0293,R2 = 0.9985

1. 按液体体积活力计算:

酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106

= 391× (ΔA+0.0293)

2. 按蛋白浓度计算:

酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr

3. 按鲜重计算:

酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(nmol/min/g鲜重)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷W

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W


150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V反总÷V样=300µL÷60µL=5;

106:转化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 1.4216x - 0.0293,R2 = 0.9985

1. 按液体体积活力计算:

酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106

= 782× (ΔA+0.0293)

2. 按蛋白浓度计算:

酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr

= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr

3. 按鲜重计算:

酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(nmol/min/g鲜重)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106÷W

= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷W


150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V反总÷V样=300µL÷60µL=5;

106:转化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。


注意事项:

1. 吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。

2. 试剂盒2+8℃保存,保质期3个月,建议尽快使用。


上海牧荣生物科技有限公司

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