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滤纸酶测试盒

简要描述:滤纸酶测试盒 滤纸酶(Filter paper Activity,FPA)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-09
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

滤纸酶测试盒

微量法100T/48S

测定意义

纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系,能水解纤维素β-1,4葡萄糖苷键生成葡萄糖,研究滤纸酶活力对纤维素酶的研究具有非常重要的意义。

测定原理

滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物,在540nm处有最大光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比,可测定计算得滤纸酶的活力。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体40mL×1瓶,4℃保存。

滤纸条:50mg×50条。

酶液提取

  1. 组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL蒸馏水)加入蒸馏水,冰浴匀浆后于4℃,12000rpm离心10min,取上清置于冰上待测。

  2. 细胞:按照细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,12000rpm离心10min,取上清置于冰上待测。

  3. 培养液或其它液体:直接检测。

测定操作

  1. 根据样本数量取两倍数量的滤纸条和Ep管,每支Ep管中放入一个卷状滤纸条(注意要放入底部),作为底物。

  2. 对照管:取200μL灭活的酶液,加入500μL试剂一,充分混匀,再加入放有滤纸条的Ep管中,标注为对照管。

  3. 测定管:取200μL酶液,加入500μL试剂一,充分混匀,再加入放有滤纸条的Ep管中,标注为测定管。

  4. 对照管和测定管同时置于50℃水浴锅中反应30min。

  5. 加入800μL试剂二,沸水浴5min,自来水冷却后取200μL于微量石英比色皿/96孔板中测定540nm处吸光值,分别记为A对照管和A测定管,△A= A测定管- A对照管。

酶活性计算公式

  1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.2805x - 0.0255,R2 = 0.9991

(1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义在50℃,pH4.6条件下,每毫克蛋白每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

FPA(U/mg prot)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V反总÷(V样×Cpr)÷T

= 0.891×(△A+0.0255)÷ Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活性定义在50℃,pH4.6条件下,每克组织每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

FPA(U/g)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T

= 0.891×(△A+0.0255)÷ W

(3)按液体体积计算

酶活性定义在50℃,pH4.6条件下,每毫升培养液每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

FPA(U/mL)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V反总÷V样÷T

= 0.891×(△A+0.0255)

(4)按细胞数量计算

酶活性定义在50℃,pH4.6条件下,每104个细胞每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

FPA(U/104cell)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V反总÷(V样×细胞数量(万个)÷V样总)÷T

= 0.891×(△A+0.0255)÷ 细胞数量(万个)

V反总:反应总体积,1.5mL,V样:反应体系中加入样本体积,0.2mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min

  1. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.1403x - 0.0255,R2 = 0.9991

(1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义在50℃,pH4.6条件下,每毫克蛋白每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

FPA(U/mg prot)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V反总÷(V样×Cpr)÷T

=1.782×(△A+0.0255)÷ Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活性定义在50℃,pH4.6条件下,每克组织每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

FPA(U/g)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T

= 1.782×(△A+0.0255)÷ W

(3)按液体体积计算

酶活性定义在50℃,pH4.6条件下,每毫升培养液每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

FPA(U/mL)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V反总÷V样÷T

= 1.782×(△A+0.0255)

(4)按细胞数量计算

酶活性定义在50℃,pH4.6条件下,每104个细胞每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

FPA(U/104cell)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V反总÷(V样×细胞数量(万个)÷V样总)÷T

= 1.782×(△A+0.0255)÷ 细胞数量(万个)

V反总:反应总体积,1.5mL,V样:反应体系中加入样本体积,0.2mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min


注意事项

  1. 用干净的镊子取出滤纸条,带手套卷成卷放入Ep管底部。

  2. 样本灭活时保证同一批样本处理时间一致,建议沸水浴十分钟。

  3. 批量样本测定之前先做1-2个样本的预实验,若吸光值超过1.2,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定,计算公式中乘以稀释倍数。

  4. 显色后取检测液时注意枪头不要碰到滤纸条,以免带入毛状物,影响测定结果。


上海牧荣生物科技有限公司

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