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海藻糖含量测试盒

简要描述:海藻糖含量测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-09
  • 访  问  量:62

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

海藻糖含量测试盒


微量法100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

海藻糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。由于海藻糖具有不同于其他碳水化合物的生物学特性,能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。

测定原理:

蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板﹑研钵、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 100ml×1瓶,4℃保存;

试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;

海藻糖提取:

1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3S,间隔10S,重复30次),室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,25℃离心10min,取上清。

2、组织的处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),冰浴匀浆,室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,25℃离心10min,取上清。

3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL提取液),冰浴匀浆,室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,25℃离心10min,取上清。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零。

  2. 调节水浴锅至95度。

3、工作液的配制:临用前在试剂一中加入3.75mL蒸馏水后,缓慢加入21.25mL浓硫酸,不断搅拌,充分溶解,待用;用不完的试剂4℃保存一周;

4、样本测定:取60μL样本和240μL工作液至EP管中,95度水浴10 min(盖紧,防止水分散失),自然冷却至室温,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,在620 nm 波长下记录测定吸光度值A。

注意:由于工作液具有强腐蚀性,请谨慎操作。

若吸光值大于1,请将样本用提取液稀释后再测定,计算公式中乘以相应的稀释倍数。


海藻糖含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 8.8976x+0.0729;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、按样本鲜重计算:

海藻糖含量(mg/g 鲜重)= [V1×(A -0.0729)÷8.8976]÷(W×V1÷V2)=0.112×(A -0.0729) ÷W。

3、按样本蛋白浓度计算:

海藻糖含量(mg/mg prot)= [V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(V1×Cpr)=0.112×(A -0.0729) ÷Cpr。

4、按细菌或细胞密度计算:

海藻糖含量(μg/104 cell)=[1000×V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(500×V1÷V2)=0.224×(A -0.0729)

5、血清(浆)海藻糖含量计算

海藻糖含量(mg/mL)=[V1×(A -0.0729)÷8.8976 )÷(V3×V1÷V2)=1.12×(A -0.0729)

1000:1mg/mL=1000µg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,60μL=0.06mL;V2:加入提取液总体积1mL;;V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 4.4488x+0.0729;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、按样本鲜重计算:

海藻糖含量(mg/g 鲜重)=[ V1×(A -0.0729)÷4.4488]÷(W×V1÷V2)=0.224×(A -0.0729) ÷W。

3、按样本蛋白浓度计算:

海藻糖含量(mg/mg prot)= [V1×(A -0.0729)÷4.4488]÷(V1×Cpr)=0.224×(A -0.0729) ÷Cpr。

4、按细菌或细胞密度计算:

海藻糖含量(μg/104cell)=[1000×V1×(A-0.0729)÷4.4488]÷(500×V1÷V2)=0.448×(A -0.0729)

5、血清(浆)海藻糖含量计算

海藻糖含量(mg/mL)=[V1×(A -0.0729)÷4.4488 )÷(V3×V1÷V2)=2.24×(A -0.0729)

1000:1mg/mL=1000µg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,60μL=0.06mL;V2:加入提取液总体积1mL;;V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

注意:*低检测限为10μg/g鲜重或0.1μg/ mg prot

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