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单宁酶(TAN)测试盒

简要描述:单宁酶(TAN)测试盒 单宁酶(Tannase,TAN)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

单宁酶(TAN)测试盒

微量法100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),它可以水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键,生成没食子酸和葡萄糖。

测定原理

使用抗氧化剂没食子酸丙酯(PG)作为单宁酶酶促反应的底物,在270nn下测定底物PG反应前后的光密度变化,计算单宁酶酶活力。

需自备的的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制

试剂一:液体100mL×2瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1支,4℃保存;临用前每支加入6mL试剂一,充分溶解后备用;用不完的试剂4℃保存;

粗酶液提取 

按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

液体样本:直接取上清测定。

测定步骤

1、分光光度计预热30min以上,调节波长到270 nm,蒸馏水调零。

2、加样表

试剂名称(μL)

对照管

测定管

95℃水浴5min后灭活的粗酶液

50


粗酶液


50

试剂二

50

50

混匀,40℃准确保温10 min后,置95℃水浴中10 min(盖紧,防止水分散失),冷却

试剂一

900

900

混匀,取200uL至微量石英比色皿或96孔UV板中,270nm处读取各管吸光值。计算ΔA=A对照-A测定。每个测定管需设个一个对照管。

注意:

  1. 可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5min 95℃沸水浴处理。

  2. 务必使用96孔UV板(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于340nm务必使用UV板)。

TAN活力单位的计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为y = 0.0058x + 0.0044,R2 = 0.9994;x为PG含量(µmol/L),y为吸光值。

  1. 按样本体积计算

单位的定义:40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位。

TAN活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷V样÷T

=34.48×( ΔA-0.0044)

2、按照蛋白浓度计算

单位的定义:40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。

TAN活性((µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V样×Cpr)÷T

=34.48×(ΔA-0.0044)÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位的定义:40℃下每克样品每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。

TAN活性(µmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V样÷V样总×W)÷T

=34.48×(ΔA-0.0044)÷W

V反总:反应体系总体积,1mL; V样:加入样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为y = 0.0029x + 0.0044,R2 = 0.9994;x为PG含量(µmol/L),y为吸光值。

1、按样本体积计算

单位的定义:40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。

TAN活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044)÷0.0029÷1000×V反总÷0.01÷V样÷T

=68.97×( ΔA-0.0044)

2、按照蛋白浓度计算

单位的定义:40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少1µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。

TAN活性(µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044)÷0.0029÷1000×V反总÷0.01÷(V样×Cpr)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044)÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位的定义:40℃下每克样品每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。

TAN活性(µmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0044)÷0.0029÷1000×V反总÷0.01÷(V样÷V样总×W)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044)÷W

V反总:反应体系总体积,1mL; V样:加入样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。


上海牧荣生物科技有限公司

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单宁酶(TAN)测试盒




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