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双缩脲法蛋白含量测试盒

简要描述:双缩脲法蛋白含量测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

双缩脲法蛋白含量测试盒

微量法 100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定,确保蛋白浓度在1~10mg/ml范围内。

测定意义:

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理:

强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物;紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。该方法测定范围为1~10mg蛋白质,适用于蛋白质浓度高的样品,尤其是动物材料。

自备仪器和用品:

离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存。

标准品:液体1mL×1瓶,5 mg/mL,4℃保存。

样品中可溶性蛋白质提取:

  1. 液体样品:澄清无色液体样品可以直接测定。

  2. 组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水))

冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即待测液。(动物样品常常需要稀释)

  1. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到540 nm,蒸馏水调零。

2. 空白管:取0.5mL EP管,加入40μL蒸馏水,200μL试剂一,混匀后室温静置15 min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,540nm比色,记为A空白管。

3. 标准管:取0.5mL EP管,加入40μL标准液,200μL试剂一,混匀后室温静置15 min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,540 nm比色,记为A标准管。

4. 测定管:取0.5mL EP管,加入40μL待测液,200μL试剂一,混匀后室温静置15 min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,540nm比色,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。

样品中蛋白质浓度计算公式:

C待测(mg/mL)= C标准管×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

                =5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

注意事项:

1.样品蛋白浓度须在1~10mg/ml范围内,低于1mg/ml不能用此法,高于10mg/ml须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验,确保蛋白浓度在1~10mg/ml范围内。

2.待测样品蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰,提取液中应不含这些物质;否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。


上海牧荣生物科技有限公司

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双缩脲法蛋白含量测试盒








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