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可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒

简要描述:可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒 可溶性淀粉合成酶(Soluble starch synthase,SSS)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒

 微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

SSS(EC 2.4.1.21通常以游离态存在于质体基质中,催化淀粉链延长,主要负责支链淀粉的合成。

测定原理

SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比,340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。

需自备的的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:40mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入14mL试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入8mL试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂五:液体×1支,-20℃保存;临用前加入500μL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入500μL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

 

粗酶液制备 

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、在EP管中按顺序加入下列试剂

试剂名称(μL)

测定管

样本

75

试剂二

135

混匀,30℃保温20 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却

试剂三

75

混匀,30℃保温30 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却,10000g 4℃离心10min,取上清液(如果一次性测定样本较多,可以将试剂四、五和六按比例配成混合液)

上清液

150

试剂四

100

试剂五

5

试剂六

5

混匀后立即340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。

注意:试剂二如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。

SSS活性计算

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

SSS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样) ÷T×稀释倍数

                =529×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

SSS活性(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×W)÷T×稀释倍数

                    =529×ΔA÷W

V 反总:反应体系总体积,2.6×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.075 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;稀释倍数:1.9;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。

b.使用96孔板测定的计算公式如下:

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

SSS(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样) ÷T×稀释倍数

 =1059×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

SSS活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×W)÷T×稀释倍数 =1059×ΔA÷W

V 反总:反应体系总体积,2.6×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.075 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;稀释倍数:1.9;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。


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可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒

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