详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
可溶性酸性转化酶(SAI)测试盒
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH,Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。
AI的最适pH为3~5。AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AI(B-AI)两种类型。S-AI主要存在于细胞液泡或自由空间中,最适 pH 为4.5~5.0(酸性),通过降解液泡中蔗糖,调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。
测定原理:
S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与S-AI活性成正比。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤和加样表:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至510nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
样本 | 50 | 50 |
试剂一 | 200 | |
试剂二 | 200 |
混匀, 37℃准确水浴30min后,95℃水浴10min(盖紧,以防水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)
试剂三 | 125 | 125 |
混匀,95℃水浴10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中, 510nm处记录各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。
S-AI活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
(1)按蛋白浓度计算:
单位的定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2)按鲜重计算:
单位的定义:37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI活性(μg/min/g鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
(1)按蛋白浓度计算:
单位的定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2)按鲜重计算:
单位的定义:37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI活性(μg/min/g鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2)÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
上海牧荣生物科技有限公司
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