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可溶性酸性转化酶(SAI)测试盒

简要描述:可溶性酸性转化酶(SAI)测试盒 可溶性酸性转化酶(Soluble acid invertase, S-AI)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
  • 访  问  量:153

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

可溶性酸性转化酶(SAI)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH,Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。                           

AI的最适pH为3~5。AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AI(B-AI)两种类型。S-AI主要存在于细胞液泡或自由空间中,最适 pH 为4.5~5.0(酸性),通过降解液泡中蔗糖,调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。

测定原理:

S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与S-AI活性成正比。

自备用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存;

试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存;

粗酶液提取:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤和加样表:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至510nm,蒸馏水调零。

2、样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL)

测定管

对照管

样本

50

50

试剂一


200

试剂二

200


混匀, 37℃准确水浴30min后,95℃水浴10min(盖紧,以防水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)

试剂三    

125

125

混匀,95℃水浴10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中, 510nm处记录各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

S-AI活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

(1)按蛋白浓度计算:

单位的定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

(2)按鲜重计算:

单位的定义:37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI活性(μg/min/g鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W

V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

b.96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

(1)按蛋白浓度计算:

单位的定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr

(2)按鲜重计算:

单位的定义:37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI活性(μg/min/g鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2)÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷W

V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。


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可溶性酸性转化酶(SAI)测试盒


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