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抗坏血酸过氧化物酶(APX)测试盒

简要描述:抗坏血酸过氧化物酶(APX)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

抗坏血酸过氧化物酶(APX)测试盒

 微量法 100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2氧化AsA,是植 AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影响到AsA的含量,APX与AsA具有一定的负相关性。

测定原理:

APX 催化H2O2氧化AsA,通过测定AsA氧化速率,来计算得APX活性。

自备仪器用品:

低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体120mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加3 mL蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体3mL×1支,4℃保存。

粗酶液提取:

按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。13000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。

测定:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长到290nm,用蒸馏水调零。

2. 试剂一在25℃中预热30min。

3.依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、140μL预热的试剂一20μL试剂二和20μL试剂三,迅速混匀后在290nm测定10s和130s光吸收A1和A2,△A=A1-A2。

APX活性计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)  按样本蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。

APX(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d)×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T

=1786×△A÷ Cpr

(2)按样本质量计算

活性单位定义:每g组织每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。

APX(nmol/min/g 鲜重 ) = △A÷(ε×d)×V反总×109÷(W×V样÷V样总)÷T

=1786×△A ÷W

ε:AsA在290nm处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm;V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 L;109:1mol=1×109nmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:催化反应时间(min),2min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1)  按样本蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。

APX(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d)×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T

=3571×△A÷ Cpr

(2)按样本质量计算

活性单位定义:每g组织每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。

APX(nmol/min/g 鲜重) = △A÷(ε×d)×V反总×109÷(W×V样÷V样总)÷T

=3571×△A ÷W

ε:AsA在290nm处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cm;d:96孔板光径(cm),0.5 cm;V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 L;109:1mol=1×109nmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:催化反应时间(min),2min。

注意事项:

配制好的试剂二4℃保存,并且3天内使用完。


上海牧荣生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

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抗坏血酸过氧化物酶(APX)测试盒






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