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抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒

简要描述:抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒 抗坏血酸氧化酶(ascorbate oxidase,AAO)活性测定试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-07
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒

微量法 100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白,属“蓝铜氧化酶"家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素b还原,该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。

测定原理:

AAO可直接氧化AsA,通过测定AsA的氧化量,可计算得AAO活力。

实验中所需仪器及设备:

低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入2mL蒸馏水充分溶解。

粗酶液提取:

按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

AAO测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到265 nm。

2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。

3. 依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、170μL预热的试剂二和10μL试剂三,迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收A1和A2,△A =A1-A2。

AAO活性计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1). 按蛋白浓度计算

AAO活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。

AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T

= 92.4×△A÷Cpr

(2). 按样本质量计算

AAO活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。

AAO(nmol/min/g 鲜重) = △A÷(ε×d)×V反总×109÷(W×V样÷V样总)÷T

= 92.4×△A÷W

ε:AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm; V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;

T:催化反应时间(min),2min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1). 按蛋白浓度计算

AAO活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。

AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T

=184.8×△A÷Cpr

(2). 按样本质量计算

AAO活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。

AAO(nmol/min/g 鲜重) = △A÷(ε×d)×V反总×109÷(W×V样÷V样总)÷T

= 184.8×△A÷W

ε:AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104 L/mol/cm;d:96孔板光径(cm),0.5 cm; V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;

T:催化反应时间(min),2min。

注意事项:

配制好的试剂放在4℃保存,三天内使用完。


上海牧荣生物科技有限公司

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抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒





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