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羧酸酯酶(CarE)测试盒

简要描述:羧酸酯酶(CarE)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:110

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

羧酸酯酶(CarE)测试盒

 微量法 100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

哺乳动物CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关,有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。

测定原理:

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固篮显色;在450 nm光吸收增加速率,计算CarE活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配置:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体15mL×2瓶, 4℃保存;

试剂三:粉剂×2支, 4℃保存,临用前取1支试剂三,加0.6ml无水乙醇充分溶解;

试剂四:粉剂×2支,-20℃保存,临用前取1支试剂四,加少量试剂二溶解;

工作液配制:临用前配制,向1瓶试剂二中,加入溶解后的试剂三和试剂四各1支,充分溶解,过滤,4℃避光保存,可用1周。

粗酶液提取:

细菌、细胞样品制备

收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μL试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);12000g 4℃离心30min,取上清液待测。

2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆;12000g 4℃离心30min,取上清液待测。

3、液体:直接测定

测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到450 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37℃水浴中预热30 min。

3. 空白管:取微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入5μL蒸馏水和200μL试剂二,迅速混匀,于450nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A1,第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1

4. 测定管:取微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入5μL上清液和200μL试剂二,迅速混匀,于450nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A3,第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3

注意:空白管只需测定一次。

CarE活性计算公式:

  1. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1 组织中CarE活性

  1. 按蛋白浓度计算

CarE活性单位定义:每mg组织蛋白在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

 

CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T

= 13.67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

  1. 按样本鲜重计算

CarE活性单位定义:每g组织在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

CarE酶活(U/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×(V样总÷V样)÷W÷T

=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷W

2 细菌或细胞中CarE活性

CarE活性单位定义:每1万个细菌或细胞在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个CarE活性单位。

CarE酶活(U/104 cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×(V样总÷V样)÷细胞密度(104 cell/mL)÷T=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷细胞密度(104 cell/mL)

3. 液体中CarE活性

CarE活性单位定义:每毫升样品在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

CarE酶活(U/mL )= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷V样÷T

=13.67×(△A测定管-△A空白管)

V反总:反应体系总体积,205μL=2.05×10-4L;V样总:上清液总体积,1 mL;V样:加入上清液体积(mL),0.005 mL;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量(g);T:反应时间(min),3min。

  1. 使用96孔板测定的计算公式如下

1 组织中CarE活性

  1. 按蛋白浓度计算

CarE活性单位定义:每mg组织蛋白在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

 

CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T

= 13.67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

  1. 按样本鲜重计算

CarE活性单位定义:每g组织在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

CarE酶活(U/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×(V样总÷V样)÷W÷T

=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷W

2 细菌或细胞中CarE活性

CarE活性单位定义:每1万个细菌或细胞在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个CarE活性单位。

CarE酶活(U/104 cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×(V样总÷V样)÷细胞密度(104 cell/mL)÷T=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷细胞密度(104 cell/mL)

3. 液体中CarE活性

CarE活性单位定义:每毫升样品在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

CarE酶活(U/mL )= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷V样÷T

=13.67×(△A测定管-△A空白管)

V反总:反应体系总体积,205μL=2.05×10-4L;V样总:上清液总体积,1 mL;V样:加入上清液体积(mL),0.005 mL;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量(g);T:反应时间(min),3min。


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羧酸酯酶(CarE)测试盒



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