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脂肪酸合成酶(FAS)测试盒

简要描述:脂肪酸合成酶(FAS)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

脂肪酸合成酶(FAS)测试盒

微量法 100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

FAS是脂肪酸合成关键酶,催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中,在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

测定原理:

FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+;NADPH在340nm有吸收峰,而NADP+没有;通过测定340nm 光吸收下降速率,计算FAS活性。

自备仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,-20℃保存。用前1d取出置于4℃充分解冻后混匀。

试剂二:粉剂×1瓶。临用前加入440μL试剂四,充分溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入440μL试剂四,充分溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:液体20mL×1瓶, 4℃保存。

试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入840μL试剂四,充分溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心40min,取上清置冰上待测。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后12000g,4℃,离心40min,取上清置于冰上待测。

  3. 血清等液体:直接测定。

FAS测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂四置于40℃水浴中预热30 min。

3. 在96孔板或EP管中依次加入20μL上清液、4μL试剂二、4μL试剂三、164μL试剂四和8μL试剂五,混匀后于340nm处测定吸光值,记录第30s和90s时吸光值,分别记录为A1和A2。△A测=A1-A2。

FAS活性计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T

=1608×△A÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T

=1608×△A ÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:37℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:37℃中每毫升样本每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T

=1608×△A

ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,1min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(Cpr×V样)÷T

=3216×△A÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T

=3216×△A÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:37℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=3216×△A÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:37℃中每毫升样本每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109 )÷V样÷T

=3216×△A

ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5 cm;V反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,1min。


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