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蔗糖合成酶(分解方向 SSⅠ)测试盒

简要描述:蔗糖合成酶(分解方向 SSⅠ)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:91

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

蔗糖合成酶(分解方向 SSⅠ)测试盒

 微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

蔗糖是源(叶片等)光合产物向"器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是双向反应酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。

测定原理

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来反映酶活性的高低。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰

试剂的组成和配制

提取液液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存;

试剂二: 液体5mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×2支,-20℃保存;临用前每支加入1.2mL试剂二充分溶解待用,现配现用;

试剂四:液体6mL×1瓶,4℃保存。

 

样品测定的准备: 

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

  2. 样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL)

测定管

对照管

样本

10

10

试剂三

40


试剂一


40

混匀,30℃准确水浴30min后,95℃水浴10min

试剂四

50

50

95℃水浴5min左右,冷却至室温

蒸馏水

400

400

混匀,取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中,540nm下测定各管

吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管需要设一个对照管。

SS-Ⅰ活性计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0012x - 0.0492;x为标准品浓度(μg/mL),y为ΔA。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W

V反总:反应体系总体积,0.05mL; V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0006x - 0.0492;x为标准品浓度(μg/mL),y为ΔA。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W

V反总:反应体系总体积,0.05mL; V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。


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蔗糖合成酶(分解方向 SSⅠ)测试盒

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