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蔗糖合成酶(合成方向 SSⅡ)测试盒

简要描述:蔗糖合成酶(合成方向 SSⅡ)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:49

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

蔗糖合成酶(合成方向 SSⅡ)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

蔗糖是源(叶片等)光合产物向"器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是双向反应酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其合成方向SS-的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义。

测定原理

SS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰

试剂的组成和配制

提取液液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体2.5mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体2mL×1瓶,4℃保存

试剂四:液体25mL×1瓶,4℃保存;

试剂五:液体6mL×1瓶,4℃避光保存;

样品测定的准备: 

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。

  2. 样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL)

测定管

对照管

标准管

空白管

样本

10

10



蒸馏水


45

45

55

试剂二



10


试剂一

45




混匀,25℃准确水浴10min

 试剂三

15

15

15

15

沸水浴中煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),冷却

试剂四

     210

     210

210

210

试剂五

     60

      60

60

60

混匀,沸水浴30min,冷却后,取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中,480nm下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。

 

SS-Ⅱ活性计算

1、按照蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

2、按照样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/g鲜重) = C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准管:标准管浓度,1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL; V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T :反应时间:10min。


上海牧荣生物科技有限公司

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蔗糖合成酶(合成方向 SSⅡ)测试盒


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