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谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒

简要描述:谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒

微量法 100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应,生成氧化型谷胱甘肽GSSG,从而保护生物膜免受ROS的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。

测定原理:

GSH-Px催化有机过氧化物氧化GSH,产生GSSG;谷胱甘肽还原酶(GR)催化NADPH还原GSSG,再生GSH,同时NADPH氧化生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,而NADP+没有;通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。

自备仪器和用品:

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、酶标仪、96孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配置:

试剂一:液体120mL×1瓶,室温保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体10μL×1支,-20℃保存。

试剂四:液体200μL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

  3. 血清等液体:直接测定。

GSH-Px测定操作:

1. 酶标仪预热30 min,调节波长到340 nm。

2. 混合试剂在25℃或者37℃(哺乳动物)水浴中预热30min。

3. 混合试剂配制:临用前,在试剂二中加入试剂一20 mL,充分震荡溶解后加入全部试剂三,混匀。(当天用完)

4. 试剂四的稀释:吸取21.5μL试剂四,加入5mL蒸馏水充分混匀,临用前配制,配制好的试剂当天使用。

5. 测定管:依次在96孔板中加入20μL上清液、160μL预热的混合试剂、20μL稀释后的试剂四,迅速混匀后于340nm处测定第30 s和第210s的吸光值,分别记为A1和A2。△A测定管= A1﹣A2。

GSH-Px活性计算:

使用96孔板测定的计算公式如下

(1). 按蛋白浓度计算

GSH-Px活力单位定义:一定温度中,每mg蛋白每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。

GSH-Px (nmol/min/mg prot)=[△A÷ε÷d×V反总×109]÷(Cpr×V样)÷T

=1072×△A÷Cpr

(2). 按样本质量计算

GSH-Px活力单位定义:一定温度中,每g样本每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。

GSH-Px (nmol/min/g 鲜重)=[△A÷ε÷d×V反总×109]÷(W×V样÷V样总)÷T

=1072×△A÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:一定温度中,每104个细胞每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。

GSH-Px (nmol/min/104 cell)= [△A÷ε÷d×V反总×109]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1072×△A÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:一定温度中,每毫升液体每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。

GSH-Px (nmol/min/mL)=[△A÷ε÷d×V反总×109]÷V样÷T

=1072×△A

ε:NADPH摩尔消光系数6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5 cm;V反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上清液蛋白浓度(mg/mL);W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL =2×10-2 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,3 min。

注意事项:

(1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力;

(2)混合试剂和底物液须临用前配制,配完后置于冰上,当天使用完;

(3)测定过程操作须迅速;

(4)细胞中GSH-Px活性测定时,细胞数目须在300万-500万之间,细胞中GSH-Px的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞。


上海牧荣生物科技有限公司

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谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒

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