详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
---|---|---|---|
应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GOT( 2.6.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的重要酶。此外,GOT在心肌细胞中含量最高,临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。
测定原理
GOT催化 α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与2,4-二硝*苯肼反应生成2,4-二硝*苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算GOT酶活力。
需自备的仪器和用品
可见分光光计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体2.5 mL×1瓶, 4℃保存;
试剂二:液体2.5 mL×1瓶, 4℃保存;
试剂三:液体25 mL×1瓶,4℃保存;
样品测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定操作表
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。
在EP管或在96孔板中加入下列试剂
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
待测样本 | 10 | |
煮沸10min的待测样本 | 10 | |
试剂一 | 25 | |
蒸馏水 | 25 |
混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应20min
试剂二 | 25 | 25 |
混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应20min
试剂三 | 240 | 240 |
混匀,室温(25℃)放置10min,505nm波长处测各管吸光度A。ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。
计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.4768x-0.0013 (x为标准品浓度,umol/mL;y为ΔA)。
2、血清(浆)GOT活力的计算
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0013)÷0.4768÷T×103=104.9×(ΔA+0.0013)
3、细胞、细菌和组织中GOT活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0013)÷0.4786×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =104.9×(ΔA+0.0013)÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =104.9×(ΔA+0.0013)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/104 cell)=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.21×(ΔA+0.0013)
V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,20min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
b.使用96孔板测定的计算公式如下:
1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.2384x-0.0013 (x为标准品浓度,umol/mL;y为ΔA)。
2、血清(浆)GOT活力的计算
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0013)÷0.2384÷T×103=209.7×(ΔA+0.0013)
3、细胞、细菌和组织中GOT活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0013)÷0.2384×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =209.7×(ΔA+0.0013)÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0013)÷0.2384×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =209.7×(ΔA+0.0013)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/104 cell)= [(ΔA+0.0013)÷0.2384×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.419×(ΔA+0.0013)
V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,20 min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
标准曲线线性范围为:0.01 umol/mL -2 umol/mL。
ΔA线性范围为:0.01 -1。
上海牧荣生物科技有限公司
国内试剂耗材经销代理。
国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。
提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。
进出口货物代理服务。
公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。
公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。
谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒
产品咨询