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超氧化物歧化酶(SOD)测试盒

简要描述:超氧化物歧化酶(SOD)测试盒 超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

超氧化物歧化酶(SOD)测试盒

 微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

 SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。

测定原理:

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.),O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在560nm处有吸收;SOD可清除O2-.,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深,说明SOD活性愈低,反之活性越高。

需自备的仪器和用品:

酶标仪、离心机、移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水

试剂的组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体5mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体200μL×1支,4℃保存;

试剂三:液体4mL×1瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×2瓶,4℃保存。

粗酶液提取: 

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500  万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤

  1. 酶标仪预热30min以上,调节波长至560nm。

  2. 将试剂二用蒸馏水稀释两倍,用多少配多少。(试剂二和蒸馏水1:1稀释)

  3. 将一瓶试剂四用5mL蒸馏水溶解(溶解后一周内用完),再用蒸馏水稀释4倍,用多少配多少(试剂四和蒸馏水1:3稀释)。

  4. 测定前将试剂一、三和四在37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴5min以上。

  5. 样本测定(在EP管或96孔板中依次加入下列试剂)

试剂名称(μL)

测定管

对照管

试剂一

45

45

试剂二

2

2

样本

18


蒸馏水


18

试剂三

35

35

试剂四

100

100

充分混匀,室温静置30min后,560nm处测定各管吸光值A。

注意事项:

1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于1,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μL试剂二原液+60μL蒸馏水)。

4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?

对照管的范围是0.4-1。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

SOD活性计算:

1、抑制百分率的计算

抑制百分率=(A对照管-A测定管) ÷A对照管× 100%

尽量使样本的抑制百分率在10-90%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于10%或大于90%,则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高,则需将样本用提取液适当稀释;如果测定出来的抑制百分率偏低,则需重新准备浓度比较高的待测样本。

2、SOD酶活性单位:在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为50%时,反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。 

3、SOD酶活性计算:

(1)血清(浆)SOD活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷V样

=11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率)

(2)组织、细菌或培养细胞SOD活力计算:

a.按样本蛋白浓度计算

SOD活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(V样×Cpr)

 =11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷Cpr 

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

b.按样本鲜重计算

SOD活性(U/g 鲜重)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(W ×V样÷V样总)

 =11.11×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷W

c.按细菌或细胞个数计算

SOD活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×V反总]÷(500×V样÷V样总)

 =0.022×抑制百分率÷(1-抑制百分率)

 V反总:反应体系总体积,0.2mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.018mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL ;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。


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超氧化物歧化酶(SOD)测试盒

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