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超氧阴离子测试盒

简要描述:超氧阴离子测试盒 超氧阴离子(Oxygen free radical, OFR)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:87

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

超氧阴离子测试盒 

微量法100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。

测定原理:

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,根据ΔA值可以计算样品中O2-含量,反应式为NH2OH + 2O2- +H+ → NO2- + H2O2 + H2O。

自备实验用品及仪器:

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体110mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:氯仿,自备。

超氧阴离子提取

  1. 植物、动物组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后,10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。

  3. 血清或培养液:直接测定。

测定操作表

  1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至530nm。

  2. 操作表


空白管

测定管

样本(μL)


200

提取液(μL)

200


试剂一(μL)

160

160

混匀,37℃水浴20min

试剂二(μL)

120

120

试剂三(μL)

120

120

混匀,37℃水浴20min

试剂四(μL)

200

200

混匀,8000g,25℃,离心5min,小心吸取上层水相200μL于微量石英比色皿/96孔板中,测定A530。ΔA=A测定-A空白,空白管只要做一管。

 

 

 

超氧阴离子含量计算公式

  1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.0242x - 0.0027,R2=0.9980

1. 组织:

(1)按照样本质量计算

超氧阴离子含量(nmol/g 鲜重)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样÷V样总×W)×2

                             =148.76×(ΔA+0.0027)÷W

超氧阴离子产生速率(nmol/ g·min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T

                                =7.44× (ΔA+0.0027)÷W

(2)按照蛋白质浓度计算

超氧阴离子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样×Cpr)×2

                                             =148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr

超氧阴离子产生速率(nmol/ mg prot·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T

                                      =7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr

2. 细菌,真菌:

超氧阴离子含量(nmol/104 cell)= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)×2

= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量

超氧阴离子产生速率(nmol/104 cell·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T

=7.44× (ΔA+0.0027)÷细胞数量

3. 血清或培养液

超氧阴离子 含量(nmol/mL)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷V样×2

=148.76× (ΔA+0.0027)

超氧阴离子产生速率(nmol/mL·min)= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T

= 7.44× (ΔA+0.0027)

V样总:加入提取液体积,1 mL; V反总:反应总体积,0.36mL;V样:反应中样品体积,0.2mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;T:反应时间,20min;2: 2分子O2-参与反应生成1分子NO2-。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.0121x - 0.0027,R2 = 0.9980

1. 组织:

(1)按照样本质量计算

超氧阴离子含量(nmol/g 鲜重)= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反总÷(V样÷V样总×W)×2

                             =297.52× (ΔA+0.0027)÷W

超氧阴离子产生速率(nmol/ g·min)=297.52× (ΔA+0.0027)÷W÷T

                                =14.88× (ΔA+0.0027)÷W

(2)按照蛋白质浓度计算

超氧阴离子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反总÷(V样×Cpr)×2

                                             =297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr

超氧阴离子产生速率(nmol/ mg prot·min)= 297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr÷T

                                      =14.88× (ΔA+0.0027)÷Cpr

2. 细菌,真菌:

超氧阴离子含量(nmol/104 cell)=(ΔA+0.0027)÷0.0121× V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)×2

=297.52× (ΔA+0.0027)÷细胞数量

超氧阴离子产生速率(nmol/104 cell·min)=297.52× (ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T

=14.88× (ΔA+0.0027)÷细胞数量

3. 血清或培养液

超氧阴离子 含量(nmol/mL)=(ΔA+0.0027)÷0.0121 ×V反总÷V样×2

=297.52×(ΔA+0.0027)

超氧阴离子产生速率(nmol/mL·min)= 297.52×(ΔA+0.0027) ÷T

=14.88×(ΔA+0.0027)

V样总:加入提取液体积,1 mL; V反总:反应总体积,0.36mL;V样:反应中样品体积,0.2mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;T:反应时间,20min;2:2分子O2-参与反应生成1分子NO2-。

注意事项

  1. OD值大于1,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。

  2. 样品制备好后,立刻进行测定,请勿将样品进行长时间的低温保存,以免影响测定结果。

  3. 试剂四有一定的毒性,请操作时做好防护措施。


上海牧荣生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

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  6. 质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

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