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过氧化氢(H2O2)测试盒

简要描述:过氧化氢(H2O2)测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:42

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

过氧化氢(H2O2)测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

H2O2是生物体内最常见的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化产生,由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子,。

测定原理:

H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在415nm有特征吸收。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮100mL、浓盐酸5mL、研钵和冰。

试剂的组成和配制:

试剂一:丙酮100mL×1瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入3mL浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃保存;(溶解时间较长,约30min,可40℃-60℃加热,务必提前准备)

试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存;

试剂四:液体30mL×1瓶,4℃保存;

H2O2提取: 

1、细菌或细胞样品的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);用试剂一定容至1mL;8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2. 组织样品的制备:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆;转移至EP管中,用试剂一定容至1mL,8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至415nm,蒸馏水调零。

  2. 将试剂二、三和四37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

  3. 在EP管中按顺序加入下列试剂

试剂名称(μL)

测定

对照

样本

250


试剂一


250

试剂二

25

25

试剂三

50

50

4000g,25℃离心10min,弃上清,留沉淀

试剂四

250

250

加入试剂四溶解沉淀后,室温静置5min,取200μL转移至微量石英比色皿或96孔板中测定415nm处吸光值A。对照管只要做一次即可。计算ΔA=A测定-A对照。

注意事项:

1、由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。

2、本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。

H2O2含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.7488x + 0.0006 (x为标准品浓度,μmol/mL;y为ΔA)。

2、血清(浆)中H2O2含量的计算:

H2O2含量(μmol/mL)=(ΔA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)

3、细菌、细胞或动物组织中H2O2含量计算

(1)按照蛋白浓度计算

H2O2含量(μmol/mg prot)=[ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

(2)按照样本质量计算

H2O2含量(μmol/g鲜重)=[ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷W

 (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

H2O2含量(μmol/104)=[ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)

V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.3744x + 0.0006  (x为标准品浓度,μmol/mL;y为ΔA)。

2、血清(浆)中H2O2含量的计算:

H2O2含量(μmol/mL)=(ΔA-0.0006)÷0.3744=2.67×(ΔA-0.0006)

3、细菌、细胞或组织中H2O2含量计算

(1)按照蛋白浓度计算

H2O2含量(μmol/mg prot)=[(ΔA-0.0006) ÷0.3744×V1]÷(V1×Cpr)=2.67×(ΔA-0.0006) ÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

(2)按照样本质量计算

H2O2含量(μmol/g鲜重)=[(ΔA-0.0006) ÷0.3744×V1]÷(W ×V1÷V2)= 2.67×(ΔA-0.0006) ÷W

 (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

H2O2含量(μmol/104)=[(ΔA-0.0006) ÷0.3744×V1]÷(500×V1÷V2)= 0.0054×(ΔA-0.0006)

V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。

注意:标曲线性范围为0.1μmol/mL-2μmol/mL,吸光度ΔA线性范围为0.03-1,若ΔA超过1则需要稀释,计算公式乘以相应稀释倍数。


上海牧荣生物科技有限公司

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过氧化氢(H2O2)测试盒

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