详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
过氧化氢酶(CAT)测试盒
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。
测定原理:
H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
工作液:液体24mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至240nm,蒸馏水调零。
测定前将CAT检测工作液在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。
准备96孔UV板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于340nm务必使用UV板)。
在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL样本和190μL工作液,混匀,记录240nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA=A1-A2。
注意事项:出现负值怎么办?
首先检查吸光值是否超过3,如果超过3很可能是没有用UV板,请换用UV板。如果未超过3,仍然出现负值则检查反应过程是否产生气泡,气泡多说明酶活性太高,气泡影响产生了负值,可以将样本用提取液稀释10倍后再检测。如果稀释样本或反应体系没有产生气泡仍然出现较小的负值,说明该样本测不到该酶活。CAT活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)CAT活力的计算:
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min/mL)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=459×ΔA
2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=459×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T=459×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T =0.917×ΔA
V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:H2O2摩尔消光系数,4.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)CAT活力的计算:
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=918×ΔA
2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T =918×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T=918×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=1.836×ΔA
V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:H2O2摩尔消光系数,4.36×104 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500万。
上海牧荣生物科技有限公司
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