详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
过氧化物酶(POD)测试盒
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
POD(EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
测定原理:
POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体100μL×1支,4℃保存;
试剂三:液体100μL×1支,4℃保存。
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至470nm,蒸馏水调零。
工作液的配制:临用前将试剂一、试剂二、试剂三按照2.6(mL):1.5(μL):1(μL)的比例混匀;在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10min以上;现配现用。
在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL工作液,混匀,记录470nm下1min时吸光值A1和2min后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。
注意:
如果ΔA小于0.005,可将反应时间延长到5min。如果ΔA大于0.5,可将样本用提取液稀释后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。
POD活性计算:
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)POD活性
单位定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
计算公式:
POD(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T =2000×ΔA
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T =4×ΔA
V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细菌或细胞总数,500万。
用96孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)POD活性
单位定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。
POD(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.005÷T =4000×ΔA
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。
POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.005÷T =4000×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。
POD(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T =4000×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。
POD(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T =8×ΔA
V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细菌或细胞总数,500万。
上海牧荣生物科技有限公司
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