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还原型谷胱甘肽(GSH)测试盒

简要描述:还原型谷胱甘肽(GSH)测试盒 还原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

还原型谷胱甘肽(GSH)测试盒_微量法 100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

GSH是细胞内最主要的抗氧化巯基物质,在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值(GSH/GSSG)是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

测定原理:

DTNB与GSH反应生成复合物,在412nm处有特征吸收峰;其吸光度与GSH含量成正比。

自备仪器和用品:

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。

粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

  3. 血清等液体:直接测定。

GSH测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到412 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中保温30min。

3. 空白管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL蒸馏水,140μL试剂二,40μL试剂三,混匀静置2min后测定412 nm吸光度A1。

4. 测定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL上清液,140μL试剂二,40μL试剂三,混匀静置2min后测定412 nm吸光度A2。

注意:空白管只需要测定一次。

GSH含量计算公式:

GSH标准曲线公式:y=1.5 x(x为GSH浓度,μ mol /mL;y为吸光值)

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按蛋白浓度计算

GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷1.5×V样÷(V样×Cpr) =0.667×(A2-A1) ÷Cpr

(2)按样本质量计算

GSH(μ mol/g 鲜重)=(A2-A1) ÷1.5×V样÷(V样÷V样总×W)=0.667×(A2-A1) ÷W

(3)按细胞数量计算

GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷1.5×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)=0.667×(A2-A1) ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷1.5×V样÷V样 =0.667×(A2-A1)

V反总:反应总体积,0.2mL;V样总:上清液总体积,1 mL;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量

b.使用96孔板测定的计算公式如下

GSH标准曲线公式:y=0.75x(x为GSH浓度,μ mol /mL;y为吸光值)

(1)按蛋白浓度计算

GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷0.75×V样÷V样÷Cpr =1.334×(A2-A1) ÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

GSH(μ mol/g 鲜重)=(A2-A1) ÷0.75×V样÷(V样÷V样总×W)=1.334×(A2-A1) ÷W

(3)按细胞数量计算

GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷0.75×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)=1.334×(A2-A1) ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷0.75×V反总÷V样 =1.334×(A2-A1)

V样总:上清液总体积,1mL;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g。

注意事项:

  1. 试剂一中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。

  2. *低检出限为0.011mmol/L。

上海牧荣生物科技有限公司

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