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还原糖含量测试盒

简要描述:还原糖含量测试盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-08
  • 访  问  量:50

详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

还原糖含量测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等,是最常见的单糖和双糖,其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物,也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。

测定原理:

加热促进碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与540nm吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样品中还原糖的量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:100mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:8mL×1瓶 ,4℃保存;

样品中还原糖的提取:

1、细菌或细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3S,间隔10S,重复30次),转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中40min并且振荡8~10次,8000g,25℃离心10min,取上清供测定用。

2、组织的处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中40min并且振荡8~10次,8000g 吧,25℃离心10min,取上清供测定用。

3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中40min并且振荡8~10次,8000g,25℃离心10min,取上清供测定用。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

  2. 调节水浴锅至95℃。

  3. 在EP管中加入下列试剂:

试剂(μL)

对照管

测定管

样本

175

175

试剂二


 125

蒸馏水

125


混匀,在95℃水浴中加热5min(盖紧,防止水分散失),取出后立即冷却至室温,混匀。取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中,540nm波长下读取对照管和测定管吸光值。计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

注意:如果ΔA大于2,需要将样本用试剂一稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数(若显色后出现分层现象,可改用蒸馏水稀释)。

还原糖含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 8.3796x- 0.3034;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、按样本鲜重计算:

还原糖(μg/g鲜重)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=119.34×(ΔA+0.3034)÷W

3、按样本蛋白浓度计算:

还原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA+0.3034)÷Cpr

4、按细菌或细胞密度计算:

还原糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(500×V1÷V2)=0.239×(ΔA+0.3034)

5、按血清(浆)体积计算:

还原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V3×V1÷V2)=1193.4×(ΔA+0.3034)

1000:1mg/mL=1000µg/mL;V1:加入样本体积,0.175mL;V2:加入试剂一体积,1 mL;V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 4.1898x - 0.3034, R2 = 0.9997;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、按样本鲜重计算:

还原糖(μg/g鲜重)=[1000×(ΔA+0.3034)÷4.1898×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA+0.3034)÷W

3、按样本蛋白浓度计算:

还原糖(μg/mg prot)= [1000×(ΔA+0.3034)÷4.1898×V1]÷(V1×Cpr)=238.67×(ΔA+0.3034)÷Cpr

4、按细菌或细胞密度计算:

还原糖(μg/104 cell)= [1000×(ΔA+0.3034)÷4.1898×V1]÷(500×V1÷V2)=0.477×(ΔA+0.3034)

5、按血清(浆)体积计算:

还原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA+0.3034)÷4.1898×V1]÷(V3×V1÷V2)=2386.7×(ΔA+0.3034)

1000:1mg/mL=1000µg/mL;V1:加入样本体积,0.175mL;V2:加入试剂一体积,1 mL;V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

注意:*低检测限为1mg/g鲜重或10μg/mg prot


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