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磷脂酶A2(PLA2)测试盒

简要描述:磷脂酶A2(PLA2)测试盒 磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)试剂盒上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-09
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

磷脂酶A2(PLA2)测试盒

微量法100T/48S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

磷脂酶A2(EC3.1.1.4)是磷脂sn-2位脂酰基水解酶,广泛存在于动植物组织、细菌、细胞核分泌物中,参与脂肪消化,精子成熟、细胞信号传递、脂质过氧化修复、宿主反应等生理过程,在控制体内磷脂类物质平衡、调节机体新陈代谢、参与疾病的病理进程等方面发挥着及其重要的作用。

测定原理

磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸胆碱(HEPC)产生游离巯基,与DTNB反应生成黄色物质,在412nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、超速冷冻离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制    

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体×5瓶,-20℃避光保存。临用前根据用量每瓶加入1.8mL试剂二充分混匀;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

样品处理

  1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。

  2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。

  3. 血清:直接测定。

测定操作


对照管

测定管

样品(μL)

20

20

试剂二(μL)

180


试剂三(μL)


180

充分混匀,37℃反应10min,于微量石英比色皿/96孔板,蒸馏水调零,测定412nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管- A对照管

计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/mg prot)= △A÷(×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T

= 73.53×△A÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每克组织每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷(×d)×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T

= 73.53×△A÷W

3. 细胞数量计算

酶活性定义每104个细胞每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/104 cell)= △A÷(×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T

= 73.53×△A÷细胞数量

4按照液体体积计算

酶活性定义每毫升血清每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/mL)= △A÷(×d)×V反总÷V样÷T

= 73.53×△A

:TNB消光系数,13600L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.1mL;W:样本质量,g;V样总:加入提取液体积,1mL;

T:反应时间,10min

b. 用96孔板测定的计算公式如下

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/mg prot)= △A÷(×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T

=147.06×△A÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每克组织每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷(×d)×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T

= 147.06×△A÷W

3. 细胞数量计算

酶活性定义每104个细胞每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/104 cell)= △A÷(×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T

=147.06×△A÷细胞数量

4按照液体体积计算

酶活性定义每毫升血清每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/mL)= △A÷(×d)×V反总÷V样÷T

= 147.06×△A

:TNB消光系数,13600L/mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V反总:反应总体积,1mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.1mL;W:样本质量,g;V样总:加入提取液体积,1mL;

T:反应时间,10min


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磷脂酶A2(PLA2)测试盒




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