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硝酸还原酶(NR)测试盒

简要描述:硝酸还原酶(NR)测试盒 硝酸还原酶(Nitrate Reductase,NR)活性测定试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-09
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

硝酸还原酶(NR)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

NR( EC 1.7.1.3)广泛存在于植物中,是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶,也是诱导酶,对作物的产量和品质有影响。

测定原理

NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰,可用分光光度法测定。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

诱导剂储备液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体10mL×1瓶,-20℃保存。

试剂二:液体5mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:液体6mL×1瓶,4℃保存(如出现结晶析出,60℃-90℃水浴溶解后使用);

试剂四:液体6mL×1瓶,4℃保存。

试剂五:标准储备液1mL,-20℃保存。

诱导剂应用液的配制:用时将诱导剂储备液稀释10倍,即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水,充分混匀。

0.1umol/mL的标准液的配制:用时将试剂五稀释100倍,即取 0.1ml试剂五加9.9mL蒸馏水,充分混匀。

样本前处理

动植物组织样品的前处理:

(1)取适量诱导剂于烧杯中,将新鲜标本洗净,滤纸吸干,放入诱导剂应用液中(淹没即可),浸泡2h,取出样本,滤纸吸干。

(2)按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

注意:

  1. 建议使用新鲜没有冷冻过的样本。

  2. 一般不要诱导处理,预测定结果没有活性(A测定≤A对照管)则需要诱导处理。

细菌或培养细胞的前处理:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。





测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2、样本测定(在EP管或96孔板中加入下列试剂)

试剂名称(μL)

加样孔

测定管

对照管

标准管

空白管

样本

20

20



0.1μmol/mL标准液



20


蒸馏水


75


95

试剂一

75


75


试剂二

25

25

25

25

混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)反应30min

试剂三

50

50

50

50

试剂四

50

50

50

50

混匀,25℃室温显色20min,540nm处比色

注意:1、标准管和空白管只需测一次,每个测定管设一个对照管。

2、诱导处理后的样本对照管中试剂二改成加25μL蒸馏水。

NR活性计算:

(1)按样本鲜重计算:

单位定义:每小时每g鲜重样品中催化产生 1μmol NO2ˉ的量为一个 NR活力单位。

NR(μmol/h/g 鲜重)= (C标准管×V1)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=0.2×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算:

单位定义:每小时每mg组织蛋白催化产生 1μmol NO2ˉ的量为一个 NR活力单位。

NR(μmol/h/mg prot)=(C标准管×V1)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=0.2×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

C标准管:标准管浓度,0.1μmol/mL;V1:加入样本体积:0.02mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,0.5h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。


上海牧荣生物科技有限公司

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硝酸还原酶(NR)测试盒




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