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游离脂肪酸含量(FFA)测试盒

简要描述:游离脂肪酸含量(FFA)测试盒 游离脂肪酸(FFA)含量试剂盒(测血清、动物组织、微生物、细胞) 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-09
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

游离脂肪酸含量(FFA)测试盒

微量法100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

游离脂肪酸,也称为非酯化脂肪酸,在与白蛋白结合的血浆中循环。动物血液中的游离脂肪酸 (FFA )含量是一项重要的生理生化指标。血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关,游离脂肪酸的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、甲状腺功能亢进等疾病而上升。

测定原理:

用有机溶剂萃取FFA。含有FFA的有机液与三乙醇胺铜反应,在有机相中形成脂肪酸铜 (铜皂) FFA一Cu。Cu离子与显色液反应形成紫红色络合物。反应形成的颜色深浅与Cu离子浓度的关系符合朗伯一比尔定律,因此可利用此反应进行比色。

自备的仪器和用品:

酶标仪、离心机、可调式移液器、96孔板、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

萃取液:液体 120 mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体 15 mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体 15 mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×1瓶,室温保存;

试剂四:液体 12 mL×1瓶,4℃保存;

样本前处理:

1.动物组织:按照动物组织质量(g):萃取液mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL萃取液),进行冰浴匀浆。震荡提取15min,5000 rpm 4℃离心5min,取有机相待测。

2.血清:吸取50 μL血清样本,加入1 mL萃取液,震荡提取15 min后,4℃,5000 rpm离心5 min,取有机相待测。

3.微生物、细胞:按照细胞数量(104个):萃取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1 mL萃取液)加入萃取液,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声2秒,间隔3秒,总时间3min);震荡提取15 min,然后5000 rpm 4℃离心5min,取有机相待测。

注意:有机相待测液可能存在于上层,也可能存在于下层,注意观察,体积较多的那一层即为有机相待测液。

测定步骤:

  1. 酶标仪预热30min以上,调节波长至550 nm。

  2. 工作液的配制:临用前根据用量按照试剂一(V):试剂二(V):试剂三(m)=1(mL):1(mL):0.66(g)的比例充分混匀。(注意:现用现配,用多少配多少,在空瓶中配制,试剂盒中带有4个空瓶,先将试剂一与试剂二混合,最后再加入试剂三粉剂)

3、测定管:吸取600μL样本,加入200μL工作液,盖紧后震荡20 min,4℃,5000 rpm离心5 min,分层后取200μL上层有机相,加入100μL试剂四,摇匀,10 min后测定550 nm的吸光值,记为A测定。

4、空白管:吸取600μL萃取液,加入200μL工作液,盖紧后震荡20 min,4℃,5000 rpm离心5 min,分层后取200μL上层有机相,加入100μL试剂四,摇匀,10 min后测定550 nm的吸光值,记为A空白。

空白管只需测一次。△A=A测定-A空白

注意:1、有机溶剂易挥发,加入96孔板后应尽快检测。

2、测定管中加入的样本即样本前处理中的有机相待测液。


FFA含量计算:

标准曲线:y = 0.0161x - 0.0141     R2 = 0.9985   x:棕榈酸标准品浓度(nmol/mL)

y:吸光值差值△A


1、血清FFA含量计算:

FFA含量(μmol/mL)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V3×V1÷V2)÷1000

=1.242×(△A+0.0141)

2、动物组织、微生物、细胞中FFA含量计算:

(1)按样本蛋白浓度计算

FFA含量(μmol/g鲜重)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(W× V1÷V2)÷1000

=0.062×(△A+0.0141)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

FFA含量(μmo/mg prot)= (△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V1×Cpr)÷1000

=0.062×(△A+0.0141)÷Cpr


V1:加入样本体积,0.6mL;V2:萃取液体积,1mL;V3:加入血清(浆)体积,0.05 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:动物组织样品质量,g; 1000:1 μmol=1000 nmol 。

注意事项:

蛋白含量不可直接用萃取液提取的有机相待测液直接测定,可用蒸馏水或缓冲液或生理盐水选用本公司的BCA法蛋白含量测定试剂盒。

*低检出限为20 nmol/mL。


上海牧荣生物科技有限公司

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游离脂肪酸含量(FFA)测试盒




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