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琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒

简要描述:琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒 琥珀酸脱氢酶(Succinate Dehydrogenase,SDH)试剂盒 上海牧荣生物科技有限公司专业实验室产品.为客户全面解决实验、生产、开发需求,提供方便、快捷的服务。

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  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-05-09
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详细介绍

品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

SDH(EC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

测定原理

SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm处具有特征吸收峰,通过600nm吸光度的变化,测定2.6-DPIP的还原速度,代表SDH酶活性。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一:100mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:20mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:1.5mL×1支,-20℃保存;

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1支,-20℃保存;

样本的前处理

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

  1. 称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

  2. 将匀浆600g,4℃离心5min。

  3. 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

  4. 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的SDH(此步可选做)。

  5. 在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体SDH活性测定。

测定步骤和加样表

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。

  2. 样本测定

(1)在试剂四中加入18mL蒸馏水充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(2)在试剂五中加入1mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂五和180μL试剂四,混匀,立即记录600nm处20s时的吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。

SDH活性的计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样) ÷T=952×ΔA÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=192×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.385×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T=384×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.77×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。


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琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒




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