详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
游离胆固醇(FC)含量测试盒
微量法 100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
FC是构成细胞膜的主要成分,也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。
测定原理:
FC氧化酶催化FC生成△4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物,在500nm有吸收峰,其颜色深浅与FC含量成正比。
自备仪器和用品:
水浴锅、可调式移液枪、酶标仪、96孔板、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:异丙醇100mL(自备);
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体40μL×1瓶,4℃保存;
TC标准品:液体1mL×1支,0.5μmol/mL,4℃保存。
FC的提取:
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌:先收集400-500万细胞或细菌到离心管内,弃上清,加1mL试剂一,超声波破碎1min(强度20%,超声2s,停1s),即FC待测液。
3.血清(浆)样品:直接测定。
测定操作:
1. 酶标仪预热30 min,调节波长到500 nm。
2. FC工作液的配制:临用前,吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中,充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中,充分混匀,FC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 标准管:依次在96孔板中加入20μL FC标准液和180μL FC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
4. 测定管:依次在96孔板中加入20μL FC待测液和180μL FC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
5、空白管:依次在96孔板中加入20μL 试剂一和180μL FC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
注意事项:
标准管和空白管只要做一管。
若测定管产生白色浑浊,可以将待测液用异丙醇稀释2~5倍后测定,并在最后结果乘以相应倍数。
计算公式:
1. 血清(浆)中FC含量计算:
FC含量(μmol /dL)= C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)×100mL
=50×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)
C标准液:0.5μmol/mL;100 mL:1dL=100 mL。
2. 组织中FC含量计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
FC含量(μmol / mg prot)= C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
= 0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
FC含量(μmol / g 鲜重)= C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W
= 0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W
C标准液:0.5μmol/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g/mL
3. 细胞、细菌中FC含量计算:
FC含量(μmol /104 cell)= C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷细菌或细胞(104 cell /L)
=0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷细菌或细胞(104 cell /L)
C标准液:0.5μmol/mL。
*低检出限为1nmol/mL。
上海牧荣生物科技有限公司
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