详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
---|---|---|---|
应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
淀粉脱分支酶(DBE)测试盒
微量法100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
DBE能够专一性地裂解支链淀粉的α-1,6糖苷键,产生线性的葡萄糖链,在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。
测定原理
采用3,5-二硝基水杨酸法测定DBE催化支链淀粉产生的还原糖,通过测定还原糖含量的变化来计算DBE活性。
需自备的的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1支,4℃保存;临用前每支加入6mL试剂一,充分混匀后备用;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:液体12mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体35mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长到540 nm,蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称(μL) | 对照管 | 测定管 |
95℃水浴5min后灭活的样本 | 100 | |
粗酶液 | 100 | |
试剂一 | 100 | |
试剂二 | 100 |
混匀,37℃准确保温2h
试剂三 | 100 | 100 |
试剂四 | 300 | 300 |
混匀,95℃水浴5min,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,540nm处读取各管吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设个一个对照管。
注意:可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5min 95℃沸水浴处理。
DBE活力单位的计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件测定回归方程为y = 3.8458x - 0.165;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
(1)按照蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每h催化产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE活力(mg /min /g鲜重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反总]÷(W× V样÷V样总)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷W
V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件测定回归方程为y = 1.9229x - 0.165;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
(1)按照蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每h催化产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷1.9229×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=0.52× (ΔA+0.165) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE活力(mg /min /g鲜重)=[ (ΔA+0.165)÷1.9229×V反总]÷(W× V样÷V样总)÷T
=0.52× (ΔA+0.165) ÷W
V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
标准曲线线性范围为0.1mg/mL-1mg/mL。
ΔA线性范围为0.01-1。
上海牧荣生物科技有限公司
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