超微量吸光度分光光度计在与蛋白质分析、提取和纯化相关的实验室和分析机构中无处不在。生物化学和生命科学应用中蛋白质浓度测量的两种技术是DeNovix的DS-11系列分光光度计/荧光计和赛默飞世尔科技的NanoDrop™系列仪器。这些分析工具中的每一种都能够实现蛋白质定量...
在600nm处测量光密度(OD)是确定细菌或酵母培养物密度的常用分光光度法,通常在细菌或酵母生长阶段。OD600测量是一种快速便捷的测定细胞密度的方法,这些细胞通常是单细胞的、太小且运动的,无法使用典型的基于图像的显微方法进行计数。可以建立与特定细胞类型的预期密度相匹配的目标OD600值,以简化相同样品类型的未来测量。这是微生物实验室在细胞生长的各个阶段检查和维护样品的一种简单方法,包括细胞周期的滞后期、对数期(也称为指数期)和稳定期。了解OD测量的当前限制虽然分光光度计是进...
对于OD600测量时,穿过样品的光被悬浮在样品中的细胞向随机方向散射。这种光散射是特定细胞大小和形状以及细胞悬液密度的函数。此外,死细胞和细胞碎片可能会导致光散射。相同密度的不同细胞类型(例如每毫升细胞数)可能导致不同的OD600值。光学配置分光光度计的光学配置在特定仪器检测到的光散射中起着重要作用。不同的OD600当在具有不同光学设置的分光光度计上测量时,将报告相同细菌培养物的值。一个OD600的0.8可以在另一台仪器上报告为0.5,而不会在任何一台设备上出现错误。换算系数...
DNA定量分光光度计是一种基于核酸分子在特定波长下对紫外光的吸收特性来测定DNA浓度的仪器,其浓度测定判定主要依据吸光度值(A)及相关比值,以下为你详细介绍:浓度测定原理DNA分子中的碱基具有共轭双键结构,在260nm波长处有最大吸收峰。根据朗伯-比尔定律,吸光度与溶液中吸光物质的浓度成正比,即A=varepsiloncl(其中A为吸光度,varepsilon为摩尔吸光系数,c为溶液浓度,l为光程长度)。通过测量DNA溶液在260nm处的吸光度,再结合已知的摩尔吸光系数和光程...
细胞计数是一种需要多种不同技术可供选择的程序,其中大多数技术都依赖于专门的实验室设备。尽管现代生命科学应用可用的细胞计数仪多种多样,但它们通常可分为两个子组之一:手动和自动细胞计数仪。手动细胞计数仪血球计数器是手动细胞计数中常用的载玻片类型。载玻片包含一个腔室,下表面带有蚀刻网格。该设备最初是为血液样本分析而开发的,但现在广泛用于各种哺乳动物细胞的细胞计数和活力分析。显微镜载玻片包含两个独立的计数室,这些计数室蚀刻有精确尺寸的精确网格。将盖玻片放置在载玻片顶部以形成计数室的顶...
有许多方法适用于定量样品中核酸的数量,但紫外-可见光吸光度法是确定样品中DNA或RNA浓度和纯度的主要方法。单链和双链DNA都强烈吸收峰值吸光度波长为260nm的紫外线。简单的浓度和纯度测量涉及直接以微量方法或包含在塑料或玻璃比色皿中穿过样品的光谱。根据Beer-Lambert定律,光穿过样品的衰减与浓度和光穿过样品的距离成正比DNA可以吸收亚可见光谱上光的目标物质。各种蛋白质的芳香族氨基酸和核糖核酸(RNA)都吸收大约260–280nm的光。鉴于难以确保样品的绝对纯度,样品...
测量蛋白质的紫外光吸收是微量蛋白质浓度和纯度分析最直接的方法。芳香族氨基酸和许多蛋白质的残基表现出很强的紫外线吸收,在280nm处达到峰值。吸收的光量与样品的浓度成正比。使用Beer-Lambert方程,可以将蛋白质量化为这种吸收行为的一个因素。直接UV吸光度测量是一种简单有效的纯化蛋白质方法,但它们并不是通用的定量方法。相反,分光光度法技术必须根据对分析物的理解以及样品中是否存在可能干扰280nm直接定量的缓冲液或溶剂进行定制。本文将探讨用于蛋白质微量分析和生物化学应用的四...