详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
总胆固醇(TC)含量测试盒
微量法 100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
TC包括游离胆固醇和胆固醇酯。TC是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。
测定原理:
利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇(FC)和游离脂肪酸(FFA),从而把胆固醇酯转化为FC;进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-胆甾烯酮和H2O2;最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成红色醌类化合物;在500nm有特征吸收峰,其颜色深浅与TC含量成正比。
自备仪器和用品:
水浴锅、可调式移液枪、酶标仪、96孔板。
试剂组成和配置:
试剂一:异丙醇100mL(自备);
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体40μL×1瓶,4℃保存;
TC标准品:液体1mL×1支,0.5μmol/mL,4℃保存。
TC的提取:
1、组织中TC的提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清,即TC待测液。
2、细胞、细菌中TC的提取:先收集400-500万细胞或细菌到离心管内,弃上清,加1mL试剂一,超声波破碎1min(强度20%,超声2s,停1s),即TC待测液。
3、血清(浆)等样品:直接测定。
测定操作:
1. /酶标仪预热30 min,调节波长到500 nm。
2. TC工作液的配制:临用前,吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中,充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中,充分混匀,TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 标准管:依次在96孔板中加入20μL FC标准液和180μL TC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
4. 测定管:依次在96孔板中加入20μL FC待测液和180μLTC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
5. 空白管:依次在96孔板中加入20μL 试剂一和180μLTC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
注意:标准管和空白管只需测定一次。
计算公式:
1. 血清(浆)中TC含量计算:
TC(μ mol /dL)=C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)×100
=50×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)
C标准液:0.5μmol/mL;100 mL:1dL=100 mL。
2. 组织中TC含量计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
TC(μ mol / mg prot)= C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
= 0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
TC(μ mol / g 鲜重)= C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W
= 0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W
C标准液:0.5μmol/mL;样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g/mL
3. 细胞、细菌中TC含量计算:
TC(μ mol /104 cell)=C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷细菌或细胞(104 cell /L)
=0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷细菌或细胞(104 cell /L)
C标准液:0.5μmol/mL。
*低检出限为1nmol/mL。
上海牧荣生物科技有限公司
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