超微量吸光度分光光度计在与蛋白质分析、提取和纯化相关的实验室和分析机构中无处不在。生物化学和生命科学应用中蛋白质浓度测量的两种技术是DeNovix的DS-11系列分光光度计/荧光计和赛默飞世尔科技的NanoDrop™系列仪器。这些分析工具中的每一种都能够实现蛋白质定量...
DNA定量分光光度计是一种基于核酸分子在特定波长下对紫外光的吸收特性来测定DNA浓度的仪器,其浓度测定判定主要依据吸光度值(A)及相关比值,以下为你详细介绍:浓度测定原理DNA分子中的碱基具有共轭双键结构,在260nm波长处有最大吸收峰。根据朗伯-比尔定律,吸光度与溶液中吸光物质的浓度成正比,即A=varepsiloncl(其中A为吸光度,varepsilon为摩尔吸光系数,c为溶液浓度,l为光程长度)。通过测量DNA溶液在260nm处的吸光度,再结合已知的摩尔吸光系数和光程...
细胞计数是一种需要多种不同技术可供选择的程序,其中大多数技术都依赖于专门的实验室设备。尽管现代生命科学应用可用的细胞计数仪多种多样,但它们通常可分为两个子组之一:手动和自动细胞计数仪。手动细胞计数仪血球计数器是手动细胞计数中常用的载玻片类型。载玻片包含一个腔室,下表面带有蚀刻网格。该设备最初是为血液样本分析而开发的,但现在广泛用于各种哺乳动物细胞的细胞计数和活力分析。显微镜载玻片包含两个独立的计数室,这些计数室蚀刻有精确尺寸的精确网格。将盖玻片放置在载玻片顶部以形成计数室的顶...
有许多方法适用于定量样品中核酸的数量,但紫外-可见光吸光度法是确定样品中DNA或RNA浓度和纯度的主要方法。单链和双链DNA都强烈吸收峰值吸光度波长为260nm的紫外线。简单的浓度和纯度测量涉及直接以微量方法或包含在塑料或玻璃比色皿中穿过样品的光谱。根据Beer-Lambert定律,光穿过样品的衰减与浓度和光穿过样品的距离成正比DNA可以吸收亚可见光谱上光的目标物质。各种蛋白质的芳香族氨基酸和核糖核酸(RNA)都吸收大约260–280nm的光。鉴于难以确保样品的绝对纯度,样品...
测量蛋白质的紫外光吸收是微量蛋白质浓度和纯度分析最直接的方法。芳香族氨基酸和许多蛋白质的残基表现出很强的紫外线吸收,在280nm处达到峰值。吸收的光量与样品的浓度成正比。使用Beer-Lambert方程,可以将蛋白质量化为这种吸收行为的一个因素。直接UV吸光度测量是一种简单有效的纯化蛋白质方法,但它们并不是通用的定量方法。相反,分光光度法技术必须根据对分析物的理解以及样品中是否存在可能干扰280nm直接定量的缓冲液或溶剂进行定制。本文将探讨用于蛋白质微量分析和生物化学应用的四...
荧光检测在使用荧光法进行样品定量的生化和生命科学应用中至关重要。这些样品包含与目标分析物特异性结合的荧光基团,并表现出不同的激发和发射特性。与已知标准品的荧光相比,发射光的强度与样品浓度相关。荧光检测可实现极其精确的生物分子检测,例如,双链DNA定量至0.0005ng/μL(ng/μl)。这种创新技术的应用经常受到以下事实的限制:传统荧光计配备的激发和发射通道很少——通常只有一个光源和光学检测器,适用于窄范围的荧光检测或特定于一个制造商的产品。多个荧光通道使科学家能够使用来自...
吸光度测量基础知识紫外-可见光吸光度测量长期以来一直是生命科学实验室中定量纯化生物分子的标准方法。该方法允许根据分子在特定波长下的吸光度曲线快速检测分子。吸光度还提供样品污染的指示。吸光度光谱的形状将根据其他分子的存在而变化,这些分子的吸收波长与目标分子相同或接近相同波长。荧光定量基础知识荧光团是吸收一个波长(激发波长)的光并发射另一个波长(发射波长)的光的分子。某些荧光团的结构只有在与特定分子(例如双链DNA)结合时才能发出荧光。荧光检测利用这种结合特异性来建立样品发射的荧...